Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (marekebisho ya kingamwili) ni polimasi ya DNA inayoweza joto kutoka kwa Thermus aquaticus YT-1, ambayo ina shughuli ya 5′→3′ ya polimerasi na shughuli ya 5′ ya endonuclease.Polimerasi ya Taq DNA ya kuanza moto ni polimerasi ya Taq DNA ambayo ilirekebishwa na kingamwili za Taq za thermolabile.Marekebisho ya kingamwili yaliongeza umaalum, unyeti, na mavuno ya PCR.
Vipengele
| Sehemu | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 ml | 4×10 mililita | 4×50 ml | 5×400 mL |
| Anza Moto Taq DNA Polymerase (Kingamwili imerekebishwa) (5 U/μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 mL |
Maombi
10 mm Tris-HCl (pH 7.4 kwa 25℃), 100 mM KCl, 0.1 mm EDTA, 1 mm dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 na 50% Glycerol.
Hali ya Uhifadhi
Usafiri wa chini ya 0°C na kuhifadhiwa kwa -25°C~-15°C.
Ufafanuzi wa Kitengo
Kitengo kimoja kinafafanuliwa kuwa kiasi cha kimeng'enya ambacho hujumuisha nmol 15 ya dNTP kwenye nyenzo isiyoyeyuka ya asidi katika dakika 30 kwa 75°C.
Udhibiti wa Ubora
1.EndShughuli ya onuclease:Uamilisho wa 20 U ya kimeng'enya na 4 μg pUC19 DNA kwa saa 4 katika 37℃ ulisababisha kutoweza kugundulika kwa uharibifu wa DNA kama ilivyoamuliwa na gel electrophoresis.
2.5 KB Lambda PCR:Mizunguko 25 ya ukuzaji wa PCR ya 5 ng Lambda DNA yenye vitengo 1.25 vya Taq DNA Polymerase ikiwa kuna 200 µM dNTPs na vianzio 0.2 µM husababisha bidhaa ya kb 5 inayotarajiwa.
3.Shughuli ya Exonuclease:Uamilisho wa mmenyuko wa 50 µl ulio na angalau 12.5 U ya Taq DNA Polymerase na 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide kwa dakika 30 katika 37℃ haitoi uharibifu unaoonekana.
4.Shughuli ya RNase:Uamilisho wa mmenyuko wa 10 µL ulio na 20 U ya kimeng'enya na 1μg ya nakala za RNA kwa saa 2 ifikapo 37°C haukusababisha uharibifu unaotambulika wa RNA kama inavyobainishwa na elektrophoresis ya gel.
5.Uzimishaji wa joto:Hapana.
Mfumo wa Majibu
| Vipengele | Kiasi |
| DNA ya Kiolezoa | hiari |
| 10 μM Mbele Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Kitangulizi cha Nyuma | 0.5 μL |
| Mchanganyiko wa dNTP (10mM kila mmoja) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Maji yasiyo na nyuklia | Hadi 25 μL |
Vidokezo:
1) a.
| DNA | Kiasi |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid au Virusi | 1 uk-1 ng |
2) b.Kikolezo bora zaidi cha Taq DNA Polymerase kinaweza kuanzia vitengo 5-50/mL (vizio 0.1-0.5/25 µL mmenyuko) katika matumizi maalum.
Itifaki ya baiskeli ya joto
PCR
| Hatua | Halijoto(°C) | Wakati | Mizunguko |
| Denaturation ya awalia | 95 ℃ | Dakika 1-3 | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | Mizunguko 30-35 |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Ugani | 68 ℃ | 1kb/dak | |
| Ugani wa Mwisho | 68 ℃ | Dakika 5 | - |
Vidokezo:
1) Denaturation ya awali ya dakika 1 kwa 95 ° C inatosha kwa amplifications nyingi.Kwa violezo vigumu, urekebishaji wa muda mrefu wa dakika 2-3 kwa 95°C unapendekezwa.Pamoja na PCR ya koloni, urekebishaji wa awali wa dakika 5 kwa 95 ° C unapendekezwa.
2) Hatua ya annealing kawaida ni 15-60 s.Halijoto ya kupenyeza hutokana na Tm ya jozi ya kwanza na kwa kawaida ni 45-68℃.
