DNase I (Isiyo na Rnase)(5u/ul)
Nambari ya paka: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ni endodeoxyribonuclease ambayo inaweza kusaga DNA yenye nyuzi moja au mbili.Inatambua na kupasua vifungo vya phosphodiester ili kuzalisha monodeoxynucleotides au oligodeoxynucleotides iliyounganishwa moja au mbili na vikundi vya phosphate kwenye 5'-terminal na hidroksili kwenye 3'-terminal.Shughuli ya DNase I inategemea Ca2+na inaweza kuamilishwa na ayoni za metali zilizogawanyika kama vile Mn2+na Zn2+.5 mM Ca2+inalinda enzyme kutoka kwa hidrolisisi.Mbele ya Mg2+, kimeng'enya hicho kingeweza kutambua na kutenganisha tovuti yoyote kwenye uzi wowote wa DNA.Mbele ya Mh2+, nyuzi mbili za DNA zinaweza kutambuliwa kwa wakati mmoja na kushikana karibu eneo moja na kuunda vipande vya mwisho bapa vya DNA au vipande vya DNA vinavyonata vilivyo na nyukleotidi 1-2 zinazochomoza.
Vipengele
| Jina | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, bila RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 mililita |
Masharti ya kuhifadhi
-25℃~-15℃ kwa kuhifadhi;Usafiri chini ya pakiti za barafu.
Maagizo
1. Tayarisha suluhisho la majibu katika bomba lisilo na RNase kulingana na idadi iliyoorodheshwa hapa chini:
| Sehemu | Kiasi |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, bila RNase (5U/μL) | 1 U kwa µg RNA① |
| ddH2O | Hadi 10μL |
Kumbuka: ①Hesabu kiasi cha DNase I ambacho kinahitaji kuongezwa kulingana na kiasi cha RNA.
2. 37 ℃ kwa dakika 15;
3. Ongeza 0.5M EDTA kwenye mkusanyiko wa mwisho wa 2.5mM~5mM, na upashe joto hadi 65℃ kwa dakika 10 ili kusimamisha majibu.Sampuli inaweza kutumika moja kwa moja kwa majibu yanayofuata kama vile unukuzi wa kinyumemajaribio.
Ufafanuzi wa Kitengo
Sehemu moja inafafanuliwa kama kiasi cha kimeng'enya ambacho kitaharibu kabisa 1µg ya pBR322DNA katika dakika 10 kwa 37 ℃.
Udhibiti wa Ubora
RNase:5U ya DNase I yenye 1.6µg MS2 RNA kwa saa 4 katika 37℃ haitoi uharibifu wowote kamakuamua na agarose gel electrophoresis.
Vidokezo
1. Tafadhali tayarisha 0.5MEDTA peke yako.
2. Tumia 1U DNase I kwa µg ya RNA.Hata hivyo, ikiwa RNA ni chini ya 1µg, tafadhali tumia 1U DNase I.
3. Tafadhali weka kimeng'enya kwenye barafu wakati wa operesheni.
