Superstart qPCR Premix plus-UNG
Nambari ya paka: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG ni kitendanishi maalumu kilichoundwa kwa ajili ya miitikio ya ubora na kiasi ya Muda Halisi ya PCR kwa kutumia ugunduzi unaotegemea uchunguzi, iliyoundwa mahususi kwa michakato ya lyophilization.Ina kimeng'enya cha riwaya cha kuanza-moto Hotstart Taq plus (DG), ambacho kimefunga shughuli zake za kimeng'enya cha Taq kwenye halijoto ya kawaida, na hivyo kuzuia upanuzi usio maalum unaosababishwa na utangulizi usio maalum wa annealing au uundaji wa primer dimer chini ya hali ya chini ya joto, hivyo kuboresha. maalum ya mmenyuko wa amplification.Kitendanishi hiki hutumia bafa mahususi ya qPCR iliyoboreshwa na mfumo wa kuzuia uchafuzi wa UNG/dUTP ili kufikia uanzishaji moto haraka, kuboresha kwa kiasi kikubwa ufanisi na usikivu wa miitikio ya qPCR.Inaweza kupata miindo mizuri ya kawaida katika anuwai ya maeneo ya upimaji na kufanya upimaji kwa usahihi, kwa ufanisi kuzuia ukuzaji chanya wa uwongo unaosababishwa na mabaki ya bidhaa za PCR au uchafuzi wa erosoli.Kitendanishi hiki kinaoana na ala nyingi za kiasi cha umeme za PCR kutoka kwa watengenezaji kama vile Applied Biosystems, Eppendorf, Bio- Rad na Roche n.k., na huonyesha uthabiti mzuri katika umbo la lyophilized.
Utungaji wa reagent
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bure) (DG)
2. 250 mm MgCl2
3. 4×lyoprotectant (si lazima)
Masharti ya Uhifadhi
Uhifadhi wa muda mrefu kwa -20 ℃;inaweza kuhifadhiwa kwa 4 ℃ kwa hadi miezi 3.Changanya vizuri kabla ya matumizi naepuka kufungia mara kwa mara na kuyeyuka.
Itifaki ya Kuendesha Baiskeli
| Utaratibu | Muda. | Wakati | Mzunguko |
| Usagaji chakula | 50℃ | 2 dakika | 1 |
| Uanzishaji wa polymerase | 95℃ | Dakika 1 ~ 5 | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Upanuzi na Upanuzi | 56 ~ 64℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyMaandalizi ya shina
|
Muundo |
Kiasi cha 25µL |
Kiasi cha 50µL |
Umakini wa Mwisho |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+bure) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mm |
| 4 × lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| DNA ya Kiolezo3 | -- | -- | -- |
| ddH2O | Hadi 25µL | Hadi 50µL | -- |
1. Mkusanyiko wa mwisho wa 0.2μM kwa primers kawaida hutoa matokeo mazuri;utendakazi wa majibu ni duni, rekebisha mkusanyiko wa primer ndani ya anuwai ya 0.2-1μM inavyohitajika.Kiwango cha uchunguzi kwa kawaida huboreshwa ndani ya masafa ya 0.1-0.3μM kupitia majaribio ya upinde rangi ili kupata michanganyiko bora zaidi.
2. Nambari ya nakala ya jeni lengwa zilizomo katika aina tofauti za violezo hutofautiana;ikiwa ni lazima, dilution ya gradient inaweza kufanywa ili kuamua kiasi bora cha nyongeza cha kiolezo.
3. Mfumo huu unaweza kuwa lyophilized;wateja wanapotumia mfumo huu bila mahitaji ya kukausha-kufungia, 4×lyoprotectant inaweza kuongezwa kwa kuchagua; ikiwa kuna bidhaa zilizokaushwa kwa kufungia zinazohitajika, wakati wa uthibitishaji wa utendaji wa vitendanishi vya kioevu, ni lazima kuongeza 4×lyoprotectant ili kuhakikisha uthabiti na vipengele vya mfumo lyophilized. na madhara.
Wakati mfumo unatumikad kwa kufungia-kukausha, kuandaa mfumo as zifuatazo:
| Muundo | 25µL Mfumo wa Majibu |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bure) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4 × lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Hadi 18~20µL |
* Ikiwa mifumo mingine ya kukausha inahitajika, tafadhali wasiliana kando.
Utaratibu wa Lyophilizationss
| Utaratibu | Muda. | Wakati | Hali | Shinikizo |
| Kabla ya kufungia | 4℃ | Dakika 30 | Shikilia |
1 atm |
| -50 ℃ | Dakika 60 | Kupoa | ||
| -50 ℃ | Dakika 180 | Shikilia | ||
| Ukaushaji wa Msingi | -30 ℃ | Dakika 60 | Inapokanzwa |
Utupu wa Mwisho |
| -30 ℃ | Dakika 70 | Shikilia | ||
| Ukaushaji wa Sekondari | 25℃ | Dakika 60 | Inapokanzwa |
Utupu wa Mwisho |
| 25℃ | Dakika 300 | Shikilia |
2. Mchakato wa lyophilization hapo juu ni wa kumbukumbu tu.Aina tofauti za bidhaa na vikaushio tofauti vya kufungia vina vigezo tofauti, kwa hivyo marekebisho yanaweza kufanywa kulingana na halisi.hali wakati wa matumizi.
3. Michakato tofauti ya lyophilization inaweza kufaa kwa ukubwa tofauti wa kundi la lyophilizedbidhaa, kwa hivyo uthibitisho wa kutosha wa upimaji lazima ufanyike wakati unatumiwa kwa uzalishaji mkubwa.
Maagizo ya kutumia lyophilized unga
1. Kwa ufupi centrifuge poda lyophilized;
2. Ongeza kiolezo cha asidi ya nucleic kwenye poda ya lyophilized na kuongeza maji hadi 25µL;
3. Changanya vizuri kwa centrifugation na kukimbia kwenye mashine.
Udhibiti wa Ubora:
1. Upimaji wa kazi: unyeti, maalum, reproducibility ya qPCR.
2. Hakuna shughuli ya nje ya viini, hakuna uchafuzi wa nje wa endo/exonuclease.
Taarifa za Kiufundi:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG hutumia kimeng'enya cha riwaya cha hot-start ambacho huwezesha kuwasha moto haraka ndani ya dakika 1~5;kupitia uundaji maalum wa bafa inafaa kwa miitikio ya kiasi ya PCR ya umeme ya multiplex.
2. Ina umaalum wa hali ya juu ambao huboresha kwa kiasi kikubwa unyeti wa ugunduzi wa kikomo wa kiasi cha fluorescence wa PCR, na kufanya curves za ukuzaji ziwe za kawaida, thamani ya fluorescence kupata uboreshaji wa dhahiri katika violezo vya mkusanyiko wa chini, vinavyofaa kama vitendanishi vya kutambua PCR vyenye unyeti wa juu.
3. Kwa primers zilizo na joto la chini la annealing au zaidi ya vipande 200bp, njia ya hatua 3 inapendekezwa.
4. Ufanisi wa utumiaji wa dUTP na unyeti kwa kimeng'enya cha UNG hutofautiana kwa jeni tofauti lengwa, kwa hivyo ikiwa kutumia mfumo wa UNG husababisha kupungua kwa unyeti wa ugunduzi, mfumo wa majibu unapaswa kurekebishwa na kuboreshwa.Ikiwa msaada wa kiufundi unahitajika tafadhali wasiliana na kampuni yetu.
5. Tumia maeneo ya kujitolea na pipettes kabla na baada ya amplification, kuvaa kinga wakati wa operesheni na kuchukua nafasi yao mara kwa mara;usifungue bomba la athari baada ya kukamilika kwa PCR ili kupunguza uchafuzi wa sampuli na bidhaa za PCR.
