2×HiF Taq pamoja na Mchanganyiko wa Master
Nambari ya Paka: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Pamoja na Dye) ni suluhu iliyo tayari kutumika ya 2×iliyochanganywa iliyo na Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs na bafa iliyoboreshwa.Kingamwili mbili za monokloni kwenye halijoto ya kawaida ambazo huzuia shughuli ya polimerasi na 3′→5′exonuclease shughuli huongezwa kwenye mchanganyiko mkuu kwa PCR ya Hot Start kwa urahisi na mahususi.Kipengele cha upanuzi huongezwa kwenye mchanganyiko mkuu ili kutoa kimeng'enya uwezo wa ukuzaji wa kipande kirefu, urefu wa ukuzaji unaweza kuwa hadi kb 13, kimeng'enya kina shughuli ya 5′→3′ ya DNA polymerase na 3′→5′. shughuli ya exonuclease, uaminifu wake ni mara 83 zaidi ya Taq DNA polymerase, ambayo ni mara 9 ya polima ya DNA ya kawaida.Inafaa kwa ukuzaji wa templeti ngumu, bidhaa ya ukuzaji ni mwisho mgumu.
2×HIF Taq plus Master Mix(Pamoja na Dye) ina faida za haraka na rahisi, unyeti wa hali ya juu, umaalumu thabiti, uthabiti mzuri, n.k., mfumo wa majibu unahitaji tu kuongeza vianzilishi na violezo, na unaweza kukuzwa kwa mbili- itifaki ya hatua, kurahisisha hatua za majaribio na kuokoa wakati.Bidhaa hii ina rangi ya kiashiria cha electrophoresis, na bidhaa za PCR zinaweza kutumika moja kwa moja kwa electrophoresis.Kwa kuongezea, bidhaa pia ina wakala maalum wa kinga, ili mchanganyiko mkuu uweze kudumisha shughuli thabiti baada ya kufungia mara kwa mara.
Masharti ya Uhifadhi
Bidhaa zinapaswa kuhifadhiwa kwa -25 ~ -15 ℃ kwa mwaka 1.
Vipimo
| Vipimo vya bidhaa | Mchanganyiko wa Mwalimu |
| Kuzingatia | 2× |
| Moto Anza | Kujengwa katika Moto Start |
| Overhang | Mkweli |
| Kasi ya majibu | Haraka |
| Ukubwa (Bidhaa ya Mwisho) | Hadi 13kb |
| Masharti ya usafiri | Barafu kavu |
| Aina ya bidhaa | Uaminifu wa juu wa mchanganyiko wa PCR |
Maagizo
1.Mfumo wa Majibu wa PCR
| Vipengele | Kiasi (μL) |
| Kiolezo cha DNA | Inafaa |
| Kitangulizi cha mbele (10 μmol/L) | 2.5 |
| Kitangulizi cha Nyuma (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq pamoja na Master Mix | 25 |
| ddH2O | hadi 50 |
2.Matumizi yaliyopendekezwa ya violezo tofauti
| Aina ya template | Kuza vipande kutoka 1kb hadi 10 kb |
| DNA ya Genomic | 50ng-200 ng |
| Plasmidi au DNA ya Virusi | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2.5 µL (Usizidi 10% ya sauti ya mwisho ya majibu ya PCR) |
3.Itifaki ya Ukuzaji
1) Itifaki ya Hatua Mbili (kiolezo cha utata)
| Hatua ya mzunguko | Muda. | Wakati | Mizunguko |
| Denaturation ya awali | 98℃ | 3 dakika | 1 |
| Denaturation | 98℃ | 10sek | 30-35 |
| Ugani | 68℃ | 30 sek/kb | |
| Ugani wa mwisho | 72℃ | 5 dakika | 1 |
2) Itifaki ya Hatua Tatu (itifaki ya kawaida)
| Hatua ya mzunguko | Muda. | Wakati | Mizunguko |
| Denaturation ya awali | 98℃ | 3 dakika | 1 |
| Denaturation | 98℃ | 10sek | 30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Ugani | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Ugani wa mwisho | 72℃ | 5 dakika | 1 |
3) Itifaki ya Kuongeza Gradient (kiolezo cha utata)
| Hatua ya mzunguko | Halijoto | Wakati | Mizunguko |
| Denaturation ya awali | 98℃ | 3 dakika | 1 |
| Denaturation | 98℃ | 10 sek | 15 (1℃ kupunguza kwa kila mzunguko) |
| Upunguzaji wa gradient | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Ugani | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Denaturation | 98℃ | 10 sek |
20 |
| Annealing | 55℃ | 20 sek | |
| Ugani | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Ugani wa mwisho | 72℃ | 5 dakika | 1 |
Vipengele chini ya itifaki tofauti ya ukuzaji
| Itifakil | Hatua Mbili | Hatua tatu | Upunguzaji wa gradient |
| Maalum. | haraka | kati | polepole |
| Umaalumu | juu | kati | juu |
| Mapato ya PCR | kati | juu | kati |
| Kiwango cha ugunduzi | juu | kati | juu |
Vidokezo
Tafadhali vaa PPE inayohitajika, koti kama hilo la maabara na glavu, ili kuhakikisha afya yako na usalama!
