Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) ni polipeptidi yenye nyuzi moja iliyo na vifungo 4 vya disulfidi yenye uzito wa molekuli wa takriban 13.7 kDa.RNase A ni endoribonuclease ambayo huharibu haswa RNA yenye ncha moja kwenye mabaki ya C na U.Hasa, cleavage inatambua dhamana ya phosphodiester iliyoundwa na 5'-ribose ya nyukleotidi na kikundi cha phosphate kwenye 3'-ribose ya nyukleotidi ya karibu ya pyrimidine, ili 2, 3'-Cyclic phosphates hutiwa hidrolisisi kwa 3 inayolingana. 'fosfati za nucleoside (km pG-pG-pC-pA-pG hupasuliwa na RNase A ili kuzalisha pG-pG-pCp na A-PG).RNase A ndiyo inayofanya kazi zaidi katika kupasua RNA yenye ncha moja.Mkazo wa kufanya kazi unaopendekezwa ni 1-100μG/mL, sambamba na mifumo mbalimbali ya athari.Mkusanyiko mdogo wa chumvi (0-100 mM NaCl) unaweza kutumika kukata RNA yenye nyuzi moja, RNA yenye nyuzi mbili, na minyororo ya RNA inayoundwa na mseto wa RNA-DNA.Hata hivyo, katika mkusanyiko wa chumvi nyingi (≥0.3 M), RNase A hupasua RNA yenye ncha moja pekee.
RNase A hutumiwa sana kuondoa RNA wakati wa utayarishaji wa DNA ya plasmid au DNA ya jeni. Iwapo DNase haifanyi kazi au la wakati wa mchakato wa utayarishaji inaweza kuathiri majibu kwa urahisi.Njia ya jadi ya kuchemsha katika umwagaji wa maji inaweza kutumika kuzima shughuli za DNase.Bidhaa hii haina DNase na protease, na haihitaji matibabu ya joto kabla ya matumizi.Kwa kuongeza, bidhaa hii pia inaweza kutumika katika majaribio ya baiolojia ya molekuli kama vile uchanganuzi wa ulinzi wa RNase na uchanganuzi wa mfuatano wa RNA.
Masharti ya Uhifadhi
Bidhaa inaweza kuhifadhiwa kwa -25～-15℃, halali kwa miaka 2.
Maagizo
Hii ni moja ya njia za kawaida za kuandaa suluhisho la kuhifadhi RNase A.Inaweza pia kutayarishwa nambinu zingine kulingana na mbinu za kimapokeo katika maabara au fasihi ya marejeleo (kama vilekuyeyuka moja kwa moja katika 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 au Tris-NaCl ufumbuzi)
1. Tumia acetate ya sodiamu ya 10 mm (pH 5.2) kuandaa 10 mg/mL ya suluhisho la kuhifadhi la RNase A.
2. Inapasha joto 100 ℃ kwa dakika 15
3. Poza hadi joto la kawaida, ongeza 1/10 ujazo wa 1 M Tris-HCl (pH 7.4), rekebisha pH yake hadi 7.4 (kwakwa mfano, ongeza 500 ml ya 10g/ml suluhisho la hifadhi ya RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Imepakiwa kidogo kwa -20℃ kwa hifadhi iliyogandishwa, ambayo inaweza kudumu kwa hadi miaka 2.
[Vidokezo]: Wakati wa kuchemsha myeyusho wa RNaseA chini ya hali zisizoegemea upande wowote, mvua ya RNase itaunda;Chemsha kwa pH ya chini, na ikiwa kuna mvua, inaweza kuzingatiwa, ambayo inaweza kusababishwa na uwepo wa uchafu wa protini.Iwapo mashapo yatapatikana baada ya kuchemka, uchafu unaweza kuondolewa kwa upenyezaji wa kasi ya juu (13000rpm), na kisha kupakizwa kwa uhifadhi wa kugandisha.
Maelezo ya bidhaa
| Visawe | Ribonuclease I;ribonuclease ya kongosho;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| Nambari ya CAS. | 9001-99-4 |
| Mwonekano | Poda nyeupe ya lyophilized |
| Uzito wa Masi | ~ 13.7kDa (mfuatano wa asidi ya amino) |
| Thamani ya Ph | 7.6 (aina ya shughuli 6-10) |
| Joto Inayofaa | 60℃ (Aina ya shughuli 15-70℃) |
| Wakala wa kuamilisha | Na2+.K+ |
| Kizuizi | Kizuizi cha Rnase |
| Mbinu ya kuwezesha | Haiwezi kuamilishwa na inapokanzwa, inashauriwa kutumia safu ya centrifuge |
| Asili | Ng'ombe |
| Umumunyifu | Mumunyifu katika maji (10 mg/ml) |
| Kupoteza kwenye kavu | ≤5.0% |
| Shughuli ya enzyme | ≥60 Vizio vya Kunitz/mg |
| Pointi ya Isoelectric | 9.6 |
Vidokezo
Kwa usalama na afya yako, tafadhali vaa makoti ya maabara na glavu zinazoweza kutumika kwa uendeshaji.
