Joto Nyeti UNG
Joto Nyeti UNG (TS-UNG) ni kupatikana kwa usemi recombinant katika E. koli.Kimeng'enya huchochea utolewaji wa urasili huru kutoka kwa DNA yenye mistari miwili yenye uracil na haifanyi kazi dhidi ya RNA.Ikilinganishwa na kimeng'enya cha kawaida cha UNG cha asili ya jeni ya E. koli, kimeng'enya cha TS-UNG kina shughuli ya juu zaidi kwenye joto la chini (20℃~37℃) na ni nyeti kwa halijoto na huzimwa kwa urahisi (50℃), huepuka kuharibika kwa ukuzaji ulio na dUTP. bidhaa kwenye joto la kawaida na shughuli ya mabaki ambayo inaweza kubaki baada ya kuanzishwa kwa enzyme ya kawaida ya UNG.Kwa hivyo, kimeng'enya cha TS-UNG haifai tu kwa majibu ya kuzuia uchafuzi wa PCR, lakini pia inalingana vyema na mpango wa ukuzaji wa RT-PCR na inaweza kutumika katika mmenyuko wa kuzuia uchafuzi wa RT-PCR.
Programu Iliyopendekezwa
Ukuzaji wa Kuzuia Uchafuzi
Hali ya Uhifadhi
-20°C kwa uhifadhi wa muda mrefu, inapaswa kuchanganywa vizuri kabla ya matumizi, epuka kufungia mara kwa mara.
Bafa ya hifadhi
20 mm Tris-HCl (pH 7.5) , 100 mM NaCl, 0.1 mm EDTA, 1 mm DTT, Kiimarishaji, 50% Glycerol.
Ufafanuzi wa Kitengo
Kiasi cha kimeng'enya kinachohitajika ili kuharibu 1µg ya DNA yenye ncha moja iliyo na besi za dU katika saa 1 katika 37°C ni kitengo 1 cha shughuli (U).
Udhibiti wa Ubora
1.Usafi wa kielektroniki wa SDS-PAGE zaidi ya 98%
2.Shughuli ya uharibifu, udhibiti wa kundi-kwa-batch, utulivu
3.Hakuna shughuli za viini vya exogenous, hakuna endonuclease ya nje au uchafuzi wa exonuclease.
Maagizo
| Vipengele | Kiasi (μL) | Mkusanyiko wa mwisho |
| 10 × PCR Buffer (dNTP bila malipo, Mg²+bure) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (Badilisha dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mm MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mm |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Mchanganyiko wa Primera | 2 | 1× |
| Kiolezo | - | ＜1μg/majibu |
| ddH₂O | Hadi 50 | - |
Kumbuka: a: Ikitumika kwa qPCR/qRT-PCR, kichunguzi cha umeme kinapaswa kuongezwa kwenye mfumo wa mmenyuko.Kawaida, mkusanyiko wa mwisho wa primer wa 0.2 μM unaweza kutoa matokeo mazuri;wakati utendaji wa mmenyuko ni duni, mkusanyiko wa primer unaweza kubadilishwa katika anuwai ya 0.2-1 μM.Kawaida, mkusanyiko wa uchunguzi umeboreshwa katika anuwai ya 0.1-0.3 μM.Majaribio ya gradient ya ukolezi yanaweza kufanywa ili kupata mchanganyiko bora wa primer na probe.
Vidokezo
1.Joto mojawapo la mmenyuko wa kimeng'enya cha TS-UNG ni cha chini kiasi, na kinaweza kuboreshwa katika anuwai ya 20℃~37℃, kipimo cha kimeng'enya na muda wa mmenyuko kinaweza kuboreshwa katika anuwai ya 0.1~0.5 U, 5~ Dakika 10;na kimeng'enya kinaweza kuzimwa katika mchakato wa unukuzi wa kinyume.
2.Inafaa kwa PCR na RT-PCR ili kuzuia uchafuzi.
3.Epuka kufungia mara kwa mara, na usikabiliane na mabadiliko makubwa ya joto.
4.Jeni tofauti za kukuzwa zina ufanisi tofauti wa utumiaji wa dUTP na unyeti kwa enzyme ya UNG, kwa hivyo, ikiwa utumiaji wa mfumo wa UNG husababisha kupungua kwa unyeti wa ugunduzi, mfumo wa mmenyuko unapaswa kurekebishwa na kuboreshwa, ikiwa unahitaji msaada wa kiufundi, tafadhali wasiliana. kampuni yetu.
