Kizuizi cha Rnase
Kizuizi cha murine RNase ni kizuia tena cha murine RNase kilichoonyeshwa na kusafishwa kutoka kwa E.coli.Inafunga kwa RNase A, B au C katika uwiano wa 1: 1 kupitia ushirikiano usio na ushirikiano, na hivyo kuzuia shughuli za vimeng'enya vitatu na kulinda RNA kutokana na uharibifu.Hata hivyo, Haifai dhidi ya RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H au RNase kutoka Aspergillus.Kizuizi cha Murine RNase kilijaribiwa na RT-PCR, RT-qPCR na IVT mRNA, na kiliendana na nakala mbalimbali za kibiashara za Reverse transcriptases, polima za DNA na polima za RNA.
Ikilinganishwa na vizuizi vya binadamu vya RNase, kizuizi cha murine RNase haina cysteines mbili ambazo ni nyeti sana kwa oxidation ambayo husababisha kutofanya kazi kwa kizuizi.Hiyo inaifanya kuwa thabiti katika viwango vya chini vya DTT (chini ya 1 mM).Kipengele hiki kinaifanya kufaa kutumika katika athari ambapo viwango vya juu vya DTT ni kinyume na athari (km RT-PCR ya muda halisi).
Amaombi
Bidhaa hii inaweza kutumika sana katika jaribio lolote ambapo uingiliaji wa RNase unawezekana ili kuepuka uharibifu wa RNA, kama vile:
1.Mchanganyiko wa kamba ya kwanza ya cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, nk.
2.Hulinda RNA dhidi ya uharibifu wakati wa unukuzi/utafsiri wa in vitro (kwa mfano, mfumo wa urudufishaji wa virusi katika vitro).
3.Uzuiaji wa shughuli za RNase wakati wa kujitenga na utakaso wa RNA.
Masharti ya Uhifadhi
Bidhaa inaweza kuhifadhiwa kwa -25～- 15 ℃, halali kwa miaka 2.
Bafa ya hifadhi
50 mM KCl, 20 mm HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mm DTT na 50% ya glycerol.
Ufafanuzi wa kitengo
Kiasi cha kizuizi cha murine RNase kinachohitajika kuzuia shughuli ya 5ng ya ribonuclease A kwa 50% ilifafanuliwa kama kitengo kimoja (U).
Uzito wa molekuli ya protini
Uzito wa Masi ya inhibitor ya murine RNase ni 50 kDa.
Udhibiti wa ubora
Exonuclease Shughuli:
40 U ya kizuizi cha murine RNase chenye 1 μg λ -Hind III humeng'enya DNA kwa 37℃ kwa saa 16 haitoi uharibifu wowote kama inavyobainishwa na electrophoresis ya gel ya agarose.
Shughuli ya Endonuclease:
40 U ya kizuizi cha murine cha RNase chenye 1μ g λ DNA katika 37℃ kwa saa 16 haitoi uharibifu kama inavyobainishwa na electrophoresis ya jeli ya agarose.
Kuchezea Shughuli:
40U ya kizuizi cha murine RNase chenye 1μ g pBR322 kwa 37℃ kwa saa 16 haitoi uharibifu wowote kama inavyobainishwa na electrophoresis ya jeli ya agarose.
RNase Shughuli:
40U ya kizuizi cha murine RNase chenye 1.6μ g MS2 RNA kwa saa 4 saa 37℃ haitoi uharibifu kama inavyobainishwa na electrophoresis ya jeli ya agarose.
E.coli DNA:
40 U ya kizuizi cha murine RNase inachunguzwa kwa uwepo wa E. coli genomic DNA kwa kutumia TaqMan qPCR yenye vianzio maalum kwa E. coli 16S rRNA locus.Uchafuzi wa DNA ya jeni ya E. koli ni ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1.Kuzungusha kwa nguvu au kuchochea kutasababisha uanzishaji wa enzyme.
2. Kiwango bora cha halijoto cha kizuizi hiki kilikuwa 25-55 ℃ , na Kilikuwa kimezimwa kwa 65℃ na zaidi.
3.Shughuli za RNase H, RNase 1 na RNase T1 hazikuzuiwa na kizuizi cha murine RNase.
4.Uzuiaji wa shughuli za RNase ulipatikana katika anuwai ya pH (pH 5-9 zote zilikuwa hai), na shughuli ya juu zaidi ilizingatiwa katika pH 7-8.
5. Kwa vile ribonucleases kwa kawaida huhifadhi shughuli chini ya hali ya kubadilika, ni lazima uangalifu uchukuliwe ili kuepuka kubadilisha chembechembe za Kizuizi cha RNase ambazo zimechanganyika na ribonuclease.Ili kuzuia kutolewa kwa ribonuclease hai, joto zaidi ya 50 ° C na viwango vya juu vya urea au mawakala wengine wa denaturing wanapaswa kuepukwa.
