Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Bluu)

Nambari ya paka: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) ni suluhu la awali la ukuzaji wa PCR wa 2× halisi wa muda halisi wenye usikivu wa hali ya juu na umaalum, una rangi ya buluu, na una athari ya ufuatiliaji wa kuongeza sampuli.Kijenzi kikuu cha Taq DNA polymerase hutumia kingamwili moto kuanza ili kuzuia kwa njia upanuzi usio maalum kwa sababu ya uwekaji wa kitangulizi wakati wa utayarishaji wa sampuli.Wakati huo huo, fomula inaongeza mambo ya kukuza ili kuboresha ufanisi wa ukuzaji wa mmenyuko wa PCR na kusawazisha upanuzi wa jeni na yaliyomo tofauti ya GC (30 ~ 70%), ili PCR ya kiasi inaweza kupata uhusiano mzuri wa mstari kwa idadi kubwa. mkoa.Bidhaa hii ina Rangi maalum ya Marejeleo ya ROX Passive, ambayo inatumika kwa zana nyingi za qPCR.Sio lazima kurekebisha mkusanyiko wa ROX kwenye vyombo tofauti.Ni muhimu tu kuongeza primers na templates kuandaa mfumo wa majibu kwa amplification.

Vipengele

Mchanganyiko wa Universal Blue qPCR Master

Masharti ya kuhifadhi

Bidhaa hiyo husafirishwa na vifurushi vya barafu na inaweza kuhifadhiwa kwa -25℃~-15℃ kwa miezi 18.Inahitajika kuzuia mionzi ya mwanga yenye nguvu wakati wa kuhifadhi au kuandaa mfumo wa mmenyuko.

Vipimo

Maagizo

1.Mfumo wa Mwitikio

[Kumbuka]: Changanya vizuri kabla ya matumizi ili kuzuia viputo vingi kutokana na kutikisika kwa nguvu.

a) Mkusanyiko wa primer: Mkusanyiko wa mwisho wa primer ni 0.2μmol/L, na pia inaweza kubadilishwa kati ya 0.1 na 1.0μmol/L inavyofaa.

b) Mkusanyiko wa kiolezo: Iwapo kiolezo hakijachanganuliwa katika suluhu ya hisa ya cDNA, kiasi kinachotumika hakipaswi kuzidi 1/10 ya jumla ya ujazo wa mmenyuko wa qPCR.

c) Kiolezo cha dilution: Inashauriwa kupunguza ufumbuzi wa hisa wa cDNA kwa mara 5-10.Kiasi bora cha kiolezo kilichoongezwa ni bora wakati thamani ya Ct iliyopatikana kwa ukuzaji ni mizunguko 20-30.

d) Mfumo wa kuitikia: Inapendekezwa kutumia 20μL au 50μL ili kuhakikisha ufanisi na kurudiwa kwa ukuzaji wa jeni lengwa.

e) Maandalizi ya mfumo: Tafadhali jitayarishe kwenye benchi safi kabisa na utumie vidokezo na mirija ya majibu bila mabaki ya viini;inashauriwa kutumia vidokezo na cartridges za chujio.Epuka uchafuzi wa msalaba na uchafuzi wa erosoli.

2.Mpango wa majibu

Programu ya Kawaida

Programu ya Haraka

[Kumbuka]: Mpango wa haraka unafaa kwa idadi kubwa ya jeni, na programu za kawaida zinaweza kujaribiwa kwa jeni tata za muundo wa sekondari.

a) Halijoto na wakati wa kuchuja: Tafadhali rekebisha kulingana na urefu wa kitangulizi na jeni lengwa.

b) Upataji wa mawimbi ya Fluorescence (★): Tafadhali weka utaratibu wa majaribio kulingana na mahitaji katika maagizo ya matumizi ya chombo.

c) Kiwango cha kuyeyuka: Programu chaguo-msingi ya chombo inaweza kutumika kawaida.

3. Uchambuzi wa Matokeo 

Angalau nakala tatu za kibaolojia zilihitajika kwa majaribio ya kiasi.Baada ya majibu, curve ya ukuzaji na curve ya kuyeyuka inahitaji kuthibitishwa.

3.1 Curve ya ukuzaji:

Curve ya kawaida ya ukuzaji ina umbo la S.Uchanganuzi wa kiasi ni sahihi zaidi wakati thamani ya Ct iko kati ya 20 na 30. Ikiwa thamani ya Ct ni chini ya 10, ni muhimu kupunguza kiolezo na kufanya jaribio tena.Wakati thamani ya Ct ni kati ya 30-35, ni muhimu kuongeza mkusanyiko wa template au kiasi cha mfumo wa majibu, ili kuboresha ufanisi wa ukuzaji na kuhakikisha usahihi wa uchambuzi wa matokeo.Wakati thamani ya Ct ni kubwa kuliko 35, matokeo ya mtihani hayawezi kuchanganua kwa kiasi kikubwa usemi wa jeni, lakini yanaweza kutumika kwa uchanganuzi wa ubora.

3.2 Mviringo wa kuyeyuka:

Kilele kimoja cha curve ya kuyeyuka kinaonyesha kuwa umaalumu wa mmenyuko ni mzuri na uchambuzi wa kiasi unaweza kufanywa;ikiwa curve ya kuyeyuka inaonyesha kilele mara mbili au nyingi, uchambuzi wa kiasi hauwezi kufanywa.Mviringo wa kuyeyuka huonyesha vilele maradufu, na ni muhimu kuhukumu ikiwa kilele kisicholengwa ni kipenyo cha kwanza au ukuzaji usio mahususi kwa kutumia DNA agarose gel electrophoresis.Ikiwa ni primer dimer, inashauriwa kupunguza mkusanyiko wa primer au upya upya primers na ufanisi wa juu wa amplification.Ikiwa ni ukuzaji usio maalum, tafadhali ongeza halijoto ya kupunguza joto, au uunda upya vianzio kwa umaalum.

Vidokezo

Tafadhali vaa PPE inayohitajika, koti kama hilo la maabara na glavu, ili kuhakikisha afya yako na usalama!

Bidhaa hii ni ya matumizi ya utafiti PEKEE!