Rnase A
Ribonuclease A(RNaseA) ni polipeptidi yenye nyuzi moja iliyo na vifungo 4 vya disulfidi na uzito wa molekuli wa takriban 13.7 kDa.RNase Ais ni endoribonuclease ambayo huharibu haswa RNA yenye ncha moja kwenye mabaki ya C na U.Hasa, mgawanyiko hutambua kifungo cha phosphodiester kilichoundwa na 5'-ribose ya nyukleotidi na kikundi cha fosfeti kwenye 3'-ribose ya nyukleotidi ya pyrimidine iliyo karibu, ili fosfati 2,3'-Cyclic ziwe hidrolisisi kwa 3 inayolingana. 'fosfati za nukleosidi (kwa mfano,pG-pG-pC-pA-pG hupasuliwa na RNase A ili kutoa pG-pG-pCp na A-PG).RNase A ndiyo inayofanya kazi zaidi katika kupasua RNA yenye ncha moja.Mkazo wa kufanya kazi unaopendekezwa ni 1- 100 μ G/mL, sambamba na mifumo mbalimbali ya athari.Mkusanyiko mdogo wa chumvi (0-100 mM NaCl) unaweza kutumika kukata RNA yenye nyuzi moja, RNA yenye nyuzi mbili, na minyororo ya RNA inayoundwa na mseto wa RNA-DNA.
Hata hivyo, katika mkusanyiko wa chumvi nyingi (≥0.3 M),RNse A hupasua RNA yenye ncha moja pekee.
RNase A hutumiwa zaidi kuondoa RNA wakati wa utayarishaji wa DNA ya plasmid au DNA ya genomic.Ikiwa DNase inatumika au la wakati wa mchakato wa utayarishaji inaweza kuathiri majibu kwa urahisi.Njia ya jadi ya kuchemsha katika umwagaji wa maji inaweza kutumika kuzima shughuli za DNase.Bidhaa hii haina DNase na protease, na haihitaji matibabu ya joto kabla ya matumizi.Kwa kuongeza, bidhaa hii pia inaweza kutumika katika majaribio ya baiolojia ya molekuli kama vile uchanganuzi wa ulinzi wa RNase na uchanganuzi wa mfuatano wa RNA.
Masharti ya kuhifadhi
Bidhaa inapaswa kuhifadhiwa kwa -25 ℃ ~ - 15 ℃ kwa miaka 2.
Vipimo
| Mwonekano | Poda |
| Kiasi | 100mg / 1g |
| Aina ya bidhaa | RNase A |
Maagizo
Hii ni moja ya njia za kawaida za kuandaa suluhisho la kuhifadhi RNase A.Inaweza pia kutayarishwakwa mbinu zingine kulingana na mbinu za kimapokeo katika maabara au fasihi ya marejeleo (kama vilekuyeyuka moja kwa moja katika 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 au Tris-NaCl ufumbuzi)
1. Tumia acetate ya sodiamu ya 10 mm (pH 5.2) kuandaa 10 mg/mL ya suluhisho la kuhifadhi la RNase A.
2. Inapasha joto 100 ℃ kwa dakika 15.
3. Poza hadi joto la kawaida, ongeza 1/10 ujazo wa 1 M Tris-HCl (pH 7.4), rekebisha pH yake hadi 7.4 (kwakwa mfano, ongeza mililita 500 za 10 mg/mL suluhisho la hifadhi ya RNase 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. Kifungashio kidogo kwa -20℃ kwa hifadhi iliyogandishwa, ambayo inaweza kudumu kwa hadi miaka 2.
[Maelezo]:
Wakati wa kuchemsha suluhisho la RNaseA chini ya hali zisizo na upande, mvua ya RNase itaunda;Chemsha kwa pH ya chini, na ikiwa kuna mvua, inaweza kuzingatiwa, ambayo inaweza kusababishwa na uwepo wa uchafu wa protini.Ikiwa sediment hupatikana baada ya kuchemsha, uchafu unaweza kuondolewa kwa kasi ya centrifugation (13000rpm), na kisha imefungwa kwa hifadhi ya kufungia.
Vidokezo
Tafadhali vaa PPE inayohitajika, koti kama hilo la maabara na glavu, ili kuhakikisha afya na usalama wako.
