5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

Nambari ya paka: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) ni mchanganyiko thabiti wa msingi wa bomba moja unaofaa kwa unukuzi wa hatua moja wa kinyume na kiasi cha PCR (qRT-PCR).Inaauni uchanganyaji wa awali wa vianzio na probes na kukaa imara baada ya kuhifadhi kwa muda mrefu kwa joto la chini.Sampuli ya kujaribiwa inaweza kuongezwa moja kwa moja wakati wa kutumia, bila operesheni ya ziada ya ufunguzi wa bomba / bomba.Bidhaa hii hutoa viambajengo, kwa mfano polimerasi ya DNA ya kuanza moto, M-MLV, uracil-labile ya DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl.₂, dNTPs (iliyo na dUTP badala ya dTTP), na vidhibiti.Kwa upanuzi wa upanuzi wa haraka wa reverse transcriptase na DNA polymerase, inawezekana kukamilisha ukuzaji wa PCR ndani ya dakika 20-40.Kitendanishi hiki hutumia bafa maalum ya qPCR yenye vimeng'enya vilivyochanganyika vya kimeng'enya cha ukuzaji kizuia kizuizi na kimeng'enya cha UNG.Kwa hivyo, inaweza kupata ukuzaji mzuri wa jeni lengwa na kuzuia ukuzaji wa uwongo unaosababishwa na mabaki ya PCR na uchafuzi wa erosoli.Kitendanishi hiki kinaoana na ala nyingi za PCR za kiasi cha fluorescence kutoka kwa watengenezaji kama vile Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad na Roche.

Sehemu

1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix

2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)

Masharti ya Uhifadhi

Vipengele vyote vinapaswa kuhifadhiwa kwa -20 ℃ kwa uhifadhi wa muda mrefu na 4 ℃ kwa hadi miezi 3.Tafadhali changanya vizuri baada ya kuyeyusha na centrifuge kabla ya kutumia.Epuka kufungia mara kwa mara.

Maandalizi ya Mfumo wa Utendaji wa qRT-PCR

1) a.Mkusanyiko wa mwisho wa primer kawaida ni 0.2μM.Kwa matokeo bora, mkusanyiko wa primer unaweza kuboreshwa ndani ya anuwai ya 0.2-1μM.Kwa ujumla, mkusanyiko wa uchunguzi unaweza kuboreshwa ndani ya anuwai ya 0.1-0.3μM.

2) b.Wakati wa kutumia Utaratibu wa haraka wa PCR, kuongeza mkusanyiko wa primers na probes inaweza kusababisha matokeo bora ya amplification, na uwiano wao unapaswa kuboreshwa ipasavyo.

3) Aina tofauti za sampuli zina aina tofauti na maudhui ya kizuizi na nambari ya nakala ya jeni inayolengwa.Kiasi cha sampuli kinapaswa kuzingatiwa na hali halisi.Fanya dilution ya sampuli kwa maji yasiyo na viini au TE Buffer, ikiwa ni lazima.

Majibu Cmasharti

Udhibiti wa Ubora

1.Ugunduzi wa kazi: unyeti, umaalumu na kurudiwa kwa qPCR.

2.Hakuna shughuli ya viini vya exogenous: hakuna endonuclease ya nje na uchafuzi wa exonuclease.

Vidokezo

1.Kiwango cha ukuzaji cha polimasi ya haraka ya DNA si chini ya 1kb/10s.Vyombo tofauti vya PCR vina kasi tofauti ya kuongeza joto na kupoeza, njia za kudhibiti halijoto na uwekaji joto, na hivyo basi uboreshaji wa mkusanyiko wako wa kitangulizi/kichunguzi na mbinu ya uendeshaji pamoja na kifaa chako mahususi cha kasi ya PCR ni muhimu.

2.Bidhaa hii hufanya utumiaji mpana, na inafaa kwa utambuzi wa Masi ya unyeti wa hali ya juu.Mbinu ya PCR ya hatua tatu inapendekezwa kwa vitangulizi vilivyo na joto la chini la anneal au kwa ukuzaji wa vipande virefu zaidi ya 200 bp.

3.Kwa kuwa amplikoni tofauti zina ufanisi tofauti wa utumiaji wa dUTP na unyeti tofauti kwa UNG, vitendanishi vinapaswa kuboreshwa ikiwa unyeti wa utambuzi utapungua wakati wa kutumia mfumo wa UNG.Tafadhali wasiliana nasi kwa usaidizi wa kiufundi ikiwa inahitajika.

4.Ili kuzuia ukuzaji wa bidhaa za PCR, eneo maalum la majaribio na pipette inahitajika kwa ukuzaji.Fanya kazi na glavu na ubadilishe mara kwa mara na usifungue bomba la PCR baada ya kukuza.