Hatua Moja RT-qPCR SYBR Green Premix
Nambari ya paka: HCB5140A
Hatua Moja ya RT-qPCR Syber Green Premix ni ya ukadiriaji wa umeme kulingana na rangi ya SYBR Green I.Kwa kutumia viasili mahususi vya jeni, unukuzi wa kinyume na miitikio ya qPCR hukamilishwa katika mrija mmoja, hivyo basi kuondoa hitaji la ufunguaji wa mara kwa mara na uendeshaji wa bomba, kuboresha kwa kiasi kikubwa ufanisi wa upimaji na kupunguza hatari ya uchafuzi.Kwa sampuli za RNA, kifurushi hiki kinatumia Reverse Transcriptase inayostahimili joto kwa usanisi bora wa cDNA na HotStart Taq DNA Polymerase kwa ukuzaji wa kiasi.Chini ya mfumo wa bafa ulioboreshwa, unyeti wa kit unaweza kuwa wa juu kama 0.1 pg kwa shabaha zilizoonyeshwa kwa juu na hadi pg 1 kwa malengo yaliyoonyeshwa kwa wastani.Seti hiyo inafaa kwa ukuzaji na upimaji wa sampuli za DNA.Huwezesha ugunduzi nyeti na upimaji wa asidi nucleic kutoka kwa sampuli tofauti za mimea na wanyama, seli na vijidudu.
Vipengele
| No | Jina | Kiasi | Kiasi |
| 1 | Bafa ya hali ya juu | 250 μL | 2×1.25 mL |
| 2 | Mchanganyiko wa Kina wa Enzyme | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase Bure H2O | 250 μL | 2×1.25 mL |
Masharti ya Uhifadhi
Bidhaa hii inapaswa kuhifadhiwa kwa -25 ~ -15 ℃ mbali na mwanga kwa mwaka 1.
Maagizo
1.Usanidi wa mfumo wa majibud
| Vipengele | Kiasi (μL) | Kiasi (μL) | Mkusanyiko wa mwisho |
| Bafa ya hali ya juu | 12.5 | 25 | 1× |
| Mchanganyiko wa Kina wa Enzyme | 1 | 2 | - |
| Primer ya Mbele (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| Kitangulizi cha Nyuma (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| Kigezo cha RNAb | X | X | - |
| RNase Bure H2Oc | hadi 25 | hadi 50 | - |
Vidokezo:
1) a.Tmkusanyiko wa mwisho wa primer ulikuwa 0.2 μmol/L, ambayo inaweza pia kubadilishwa kati ya 0.1 na 1μmol/L inavyofaa.
2) b.Kitendanishi ni nyeti sana, na Jumla ya RNA katika anuwai ya 1pg-1μg, na majaribio ya sampuli za binadamu yalionyesha ingizo bora la 1 pg-100 ng, kudhibiti kwa thamani ya jumla ya Ct katika safu ya 15-30 inavyofaa.
3) c.Inapendekezwa kutumia 20μL au 50μL ili kuhakikisha uhalali na uzazi wa ukuzaji wa jeni lengwa.
4) d.Tafadhali jitayarishe katika benchi iliyo safi kabisa na utumie vidokezo visivyo na mabaki ya nyuklia na mirija ya majibu;vidokezo na cartridges ya chujio vinapendekezwa.Epuka uchafuzi wa msalaba na uchafuzi wa erosoli.
2.Mpango wa majibu
| Hatua ya mzunguko | Muda. | Wakati | Mizunguko |
| Unukuzi wa kinyume | 50℃a | 6 dakika | 1 |
| Denaturation ya awali | 95℃ | Dakika 5 | 1 |
| Mwitikio wa ukuzaji | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Hatua ya curve ya kuyeyuka | Chaguomsingi za Ala | 1 | |
Vidokezo:
1) a.Halijoto ya unukuzi wa kinyume inaweza kuchaguliwa kati ya 50-55°C kulingana na mahitaji ya majaribio.Kwa sampuli za DNA, mchakato wa unukuzi wa kinyume unaweza kuachwa.
2) b.Katika hali maalum joto la annealing / ugani linaweza kubadilishwa kulingana na thamani ya primer Tm, 60 ° C inapendekezwa.
Vidokezo
1. Bidhaa hii ni kwa matumizi ya utafiti pekee.
2. Tafadhali fanya kazi na makoti ya maabara na glavu zinazoweza kutumika kwa usalama wako.
