2×Sensi Direct Premix-UNG (Chunguza qPCR)
Nambari ya paka: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) imeundwa kutekeleza PCR moja kwa moja kutoka kwa sampuli bila uchimbaji wa DNA au utayarishaji wa sampuli.Kitendanishi hiki kinajumuisha DNA polymerase ya kuanza moto, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl.2, dNTPs (pamoja na dUTP badala ya dTTP), na vidhibiti, kwa kiasi cha PCR (qPCR).Kitendanishi hiki hurekebisha uwezo wa juu wa kustahimili vizuizi, na hivyo basi kinaweza kutumika moja kwa moja kwa utambuzi wa sampuli kama vile usufi wa koo, mate, damu nzima inayozuia kuganda, plasma na seramu bila kukatwa DNA.Kitendanishi hutumia buffer ya umiliki wa qPCR na vimeng'enya vilivyochanganyika vya DNA polimasi ya kuzuia vizuizi na kimeng'enya cha UNG.Kwa hivyo, inaweza kupata upanuzi mzuri wa jeni lengwa katika sampuli zilizo na vizuizi na kuzuia ukuzaji chanya wa uwongo unaosababishwa na mabaki ya PCR na uchafuzi wa erosoli.Kitendanishi hiki kinaoana na ala nyingi za kiasi cha umeme za PCR, kama vile Mifumo ya Kihai iliyotumika, Eppendorf, Bio-Rad, Roche na kadhalika.
Vipengele
1. Mchanganyiko wa 50×SensiDirect Enzyme/UNG
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Masharti ya kuhifadhi
Vipengele vyote vinapaswa kuhifadhiwa kwa -20 ℃ kwa uhifadhi wa muda mrefu na 4 ℃ kwa hadi miezi 3.Tafadhali changanya vizuri baada ya kuyeyusha na centrifuge kabla ya kutumia.Epuka kufungia mara kwa mara.
Itifaki ya Kuendesha Baiskeli
| Hatua | Halijoto | Wakati | Mzunguko |
| Usagaji chakula | 50℃ | 2 dakika | 1 |
| Uanzishaji wa polymerase | 95℃ | Dakika 1-5 | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| Annealing/Upanuzi | 56-64 ℃ | 20-60s |
Maelekezo ya mabomba
| Kitendanishi | Kiasi kwa mwitikio | Kiasi kwa kila jibu | Umakini wa Mwisho |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mchanganyiko | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Sampuli3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Jumla ya sauti | 25 μL | 50 μL | - |
1. Mkusanyiko wa mwisho wa primer ni kawaida 0.2μM.Kwa matokeo bora, mkusanyiko wa primer unaweza kuboreshwa ndani ya anuwai ya 0.2-1μM.
2. Kwa ujumla, mkusanyiko wa uchunguzi unaweza kuboreshwa ndani ya anuwai ya 0.1-0.3μM.Mkusanyiko unaofaa zaidi wa uchunguzi unahusiana na kifaa cha ukuzaji cha PCR cha wakati halisi, aina ya uchunguzi, na aina ya dutu ya lebo ya fluorescent.Tafadhali rejelea mwongozo wa chombo au mahitaji maalum ya kila kichunguzi cha umeme.
3. Aina tofauti za sampuli zina aina tofauti na maudhui ya kizuizi na nambari ya nakala ya jeni inayolengwa.Kiasi cha sampuli kinapaswa kuzingatiwa na hali halisi.Fanya dilution ya sampuli kwa kuongeza maji yasiyo na viini au TE Buffer, ikiwa ni lazima.
4. Kiasi kinachopendekezwa cha sampuli tofauti:
| Sampuli | Kiasi kwa moja 50 μL mwitikio | Upeo wa juu uwiano |
| Anticoagulated damu nzima | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Seramu | 10 μL | 20% |
| Kitambaa cha koo | 10 μL | 20% |
| Mate | 10 μL | 20% |
Udhibiti wa Ubora
1. Ugunduzi wa kazi: unyeti, umaalumu na kurudiwa kwa qPCR.
2. Hakuna shughuli za viini vya exogenous: hakuna endonuclease exogenous na uchafuzi wa exonuclease.
Vidokezo vya Bidhaa
1. Bidhaa hii hutumia aina mpya ya polimerasi ya DNA inayoanza moto, ambayo inaweza kuamilishwa baada ya dakika 1-5. Kwa kuwa bafa yake ya athari imeboreshwa, inafaa zaidi kwa PCR ya kipimo cha mara mbili au nyingi kwa kutumia mbinu ya uchunguzi.
2. Ikiwa thamani ya Rn ya ukuzaji wa PCR ni ya chini sana au ukuzaji umezuiwa kwa wazi, kupunguza kiasi cha sampuli, kuongeza sauti ya majibu au dilution ya awali ya sampuli inaweza kuboresha matokeo.
3. Mkusanyiko wa damu, mate, mkojo, usufi wa koo, n.k. unapaswa kufuata mahitaji ya vigezo vya kliniki, na sampuli mpya inaweza kutumika kuzuia uharibifu wa asidi ya nukleiki.
4. Kwa kuwa amplikoni tofauti zina ufanisi tofauti wa matumizi kwa dUTP na unyeti kwa UNG, vitendanishi vinapaswa kuboreshwa ikiwa unyeti wa kutambua hupungua wakati wa kutumia mfumo wa UNG.Tafadhali wasiliana nasi kwa usaidizi wa kiufundi ikiwa inahitajika.
5. Ili kuzuia ukuzaji wa bidhaa za PCR kati ya athari za hatua moja, eneo maalum la majaribio na pipette inahitajika kwa ukuzaji.Fanya kazi na glavu na ubadilishe mara kwa mara na usifungue bomba la majibu baada ya ukuzaji wa PCR.
