Vimeng'enya vya UDG/UNG
UDG(uracil DNA glycosylase) inaweza kuchochea hidrolisisi ya kiungo cha N-glycosidi kati ya msingi wa uracil na uti wa mgongo wa sukari-fosfati katika ssDNA na dsDNA.Inaweza kudhibiti uchafuzi wa erosoli kwa urahisi na inafaa kwa mifumo ya kawaida ya baiolojia ya molekuli kama vile PCR, qPCR, RT-qPCR na LAMP.
Vipimo
| Mwenyeji wa Kujieleza | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase gene |
| Uzito wa Masi | 24. 8kDa |
| Usafi | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Kuzima joto | 95℃, dakika 5~10 |
| Ufafanuzi wa Kitengo | Kitengo kimoja (U) kinafafanuliwa kuwa kiasi cha kimeng'enya kinachohitajika ili kuchochea hidrolisisi ya dsDNA iliyo na l μg dU katika dakika 30 katika 25℃. |
Hifadhi
Bidhaa inapaswa kuhifadhiwa kwa -25 ℃ ~ -15 ° C kwa miaka miwili.
Maagizo
1.Maandalizi ya mchanganyiko wa mmenyuko wa PCR kulingana na mfumo ufuatao
| Vipengele | Kiasi (μL) | Mkusanyiko wa mwisho |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol / Leach |
| DNA ya Kiolezo | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | U/μL 1 |
| ddH₂O | Hadi 50 | - |
Kumbuka: Kulingana na mahitaji ya majaribio, mkusanyiko wa mwisho wa dUTP unaweza kubadilishwa kati ya 0.2-0.6 mmol/L, na 0.2 mmol/L dTTP inaweza kuongezwa kwa kuchagua.
2.Utaratibu wa kukuza
| Hatua ya mzunguko | Halijoto | Wakati | Mizunguko |
| Uharibifu wa kiolezo chenye dU | 25℃ | Dakika 10 | 1 |
| Uanzishaji wa UDG, muundo wa awali wa kiolezo | 95℃ | Dakika 5-10 | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Ugani | 72℃ | 30sek/kb | |
| Ugani wa mwisho | 72℃ | 5 dakika | 1 |
Kumbuka: Muda wa majibu katika 25°C unaweza kubadilishwa ndani ya dakika 5-10 kulingana na mahitaji ya majaribio.
Vidokezo
1.UDG inafanya kazi katika vibafa vingi vya majibu ya PCR.
2.Enzymes inapaswa kuhifadhiwa kwenye sanduku la barafu au kwenye bafu ya barafu inapotumiwa, na inapaswa kuhifadhiwa kwenye -20 ° C mara baada ya matumizi.
3.Tafadhali vaa PPE inayohitajika, koti kama hilo la maabara na glavu, ili kuhakikisha afya yako na usalama!
