Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG au UDG) ni koni recombinant ya E.coli yenye uzito wa molekuli ya 25 kDa.Huchochea utolewaji wa urasil bila malipo kutoka kwa DNA yenye nyuzi moja na yenye nyuzi mbili iliyo na uracil, na haifanyi kazi dhidi ya RNA, na inaweza kutumika kuzuia uchafuzi wa bidhaa za ukuzaji wa PCR.Kanuni ya utendaji inategemea ukweli kwamba ikiwa dUTP inabadilishwa kwa dTTP katika mmenyuko wa PCR na bidhaa ya ukuzaji ya PCR iliyo na besi za dU imeundwa, kimeng'enya kinaweza kuvunja kwa hiari kifungo cha glycosidic cha besi za U katika nyuzi moja na iliyoachwa mara mbili. DNA na kuharibu bidhaa ya ukuzaji wa PCR.
Programu Iliyopendekezwa
Ukuzaji wa Kuzuia Uchafuzi
Hali ya Uhifadhi
-20°C kwa uhifadhi wa muda mrefu, inapaswa kuchanganywa vizuri kabla ya matumizi, epuka kufungia mara kwa mara.
Bafa ya hifadhi
20 mm Tris-HCl (pH 8.0) , 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mm DTT, Kiimarishaji, 50% Glycerol.
Ufafanuzi wa Kitengo
Kiasi cha kimeng'enya kinachohitajika ili kuharibu 1µg ya DNA yenye ncha moja iliyo na besi za dU katika saa 1 katika 37°C ni kitengo 1.
Udhibiti wa Ubora
1.Usafi wa kielektroniki wa SDS-PAGE zaidi ya 98%
2.Usikivu wa kukuza, udhibiti wa kundi-kwa-batch, utulivu
3.Baada ya 1U ya UNG kutibiwa kwa 50℃ kwa dakika 2, kiolezo kilicho na U chini ya nakala 103 kinapaswa kuharibiwa kabisa na hakuna bidhaa ya ukuzaji inayoweza kuzalishwa.
4.Hakuna shughuli ya nje ya viini
Maagizo
| Vipengele | Kiasi (μL) | Mkusanyiko wa mwisho |
| 10 × PCR Buffer (dNTP bila malipo, Mg²+bure) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (Badilisha dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mm MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mm |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × Mchanganyiko wa Primera | 2 | 1× |
| Kiolezo | - | ＜1μg/majibu |
| ddH₂O | Hadi 50 | - |
Kumbuka: a: Ikitumika kwa qPCR/qRT-PCR, kichunguzi cha umeme kinapaswa kuongezwa kwenye mfumo wa mmenyuko.Kawaida, mkusanyiko wa mwisho wa primer wa 0.2 μM unaweza kutoa matokeo mazuri;wakati utendaji wa mmenyuko ni duni, mkusanyiko wa primer unaweza kubadilishwa katika anuwai ya 0.2-1 μM.Kawaida, mkusanyiko wa uchunguzi umeboreshwa katika anuwai ya 0.1-0.3 μM.Majaribio ya gradient ya ukolezi yanaweza kufanywa ili kupata mchanganyiko bora wa primer na probe.
Vidokezo
1.Kimeng'enya cha UNG kinaweza kutumika kuondoa bidhaa zilizochafuliwa za ukuzaji wa dUTP kutoka kwa mfumo wa athari kabla ya mmenyuko wa ukuzaji wa PCR, kisha ili kuepuka matokeo chanya ya uwongo kutokana na uchafuzi wa bidhaa.
2.Joto mojawapo la kimeng'enya cha UNG cha kutumika katika mmenyuko wa kuzuia uchafuzi wa PCR kwa ujumla ni 50℃ kwa dakika 2;hali ya kutokuwezesha ni 95℃ kwa dakika 5.
3.Epuka kufungia mara kwa mara, na usikabiliane na mabadiliko makubwa ya joto.
4.Jeni tofauti za kukuzwa zina ufanisi tofauti wa utumiaji wa dUTP na unyeti kwa enzyme ya UNG, kwa hivyo, ikiwa utumiaji wa mfumo wa UNG husababisha kupungua kwa unyeti wa ugunduzi, mfumo wa mmenyuko unapaswa kurekebishwa na kuboreshwa, ikiwa unahitaji msaada wa kiufundi, tafadhali wasiliana. kampuni yetu.
