Wild Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase ni DNA polimasi inayoweza joto kutoka kwa Thermus aquaticus YT-1, ambayo ina shughuli ya polimerasi ya 5′→3′ na shughuli 5′ ya endonuclease.
Vipengele
| Sehemu | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Hali ya Uhifadhi
Usafiri wa chini ya 0°C na kuhifadhiwa kwa -25°C~-15°C.
Ufafanuzi wa Kitengo
Kitengo kimoja kinafafanuliwa kuwa kiasi cha kimeng'enya ambacho hujumuisha nmol 15 ya dNTP kwenye nyenzo isiyoyeyuka ya asidi katika dakika 30 kwa 75°C.
Udhibiti wa Ubora
1.Uchunguzi wa Usafi wa Protini (SDS-PAGE):Usafi wa polimerasi ya Taq DNA ulibainishwa na uchanganuzi wa SDS-PAGE ≥95%.
2.EndShughuli ya onuclease:Kiwango cha chini cha 5 U cha Taq DNA polymerase yenye 1 μg λDNA kwa saa 16 katika 37 ℃ husababisha uharibifu wowote unaotambulika kama ilivyobainishwa.
3.Shughuli ya Exonuclease:Kiwango cha chini cha 5 U cha Taq DNA polimasi iliyo na 1 μg λ -Hind Ⅲ humeng'enya DNA kwa saa 16 saa 37 ℃ husababisha hakuna uharibifu unaotambulika kama ilivyobainishwa.
4.Shughuli ya Nickase:Kiwango cha chini cha 5 U cha polimerasi ya Taq DNA yenye 1 μg pBR322 DNA kwa saa 16 katika 37°C haitokei uharibifu unaotambulika kama ilivyobainishwa.
5.Shughuli ya RNase:Kiwango cha chini cha 5 U cha polimerasi ya Taq DNA yenye 1.6 μg MS2 RNA kwa saa 16 katika 37°C husababisha uharibifu usioweza kutambulika kama ilivyobainishwa.
6.E. koliDNA:5 U of Taq DNA polymerase inakaguliwa kwa uwepo wa E. koli genomic DNA kwa kutumia TaqMan qPCR yenye vianzio maalum kwa E. coli 16S rRNA locus.Uchafuzi wa DNA ya E. koli ni ≤1 Nakala.
7.Ukuzaji wa PCR (5.0 kb Lambda DNA)- Mwitikio wa 50 µL ulio na 5 ng Lambda DNA yenye vitengo 5 vya Taq DNA Polymerase kwa mizunguko 25 ya ukuzaji wa PCR husababisha bidhaa inayotarajiwa ya kb 5.0.
Usanidi wa Majibu
| Vipengele | Kiasi |
| DNA ya Kiolezoa | hiari |
| 10 μM Mbele Primer | 1 μL |
| 10 μM Kitangulizi cha Nyuma | 1 μL |
| Mchanganyiko wa dNTP (10mM kila mmoja) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb | 0.25 μL |
| Maji yasiyo na nyuklia | Hadi 50 μL |
Vidokezo:
1) Mkusanyiko bora wa majibu ya violezo tofauti ni tofauti.Jedwali lifuatalo linaonyesha matumizi ya kiolezo kilichopendekezwa cha mfumo wa maitikio wa 50 µL.
| DNA | Kiasi |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid au Virusi | 1 uk-1 ng |
2) Kiwango bora zaidi cha Taq DNA Polymerase kinaweza kuanzia 0.25 µL~1 µL katika matumizi maalum.
MwitikioMpango
| Hatua | Halijoto(°C) | Wakati | Mizunguko |
| Denaturation ya awalia | 95 ℃ | Dakika 5 | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | Mizunguko 30-35 |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 kik | |
| Ugani | 72 ℃ | 1kb/dak | |
| Ugani wa Mwisho | 72 ℃ | Dakika 5 | - |
Vidokezo:
1) Hali ya awali ya denaturation inafaa kwa athari nyingi za ukuzaji na inaweza kurekebishwa kulingana na ugumu wa muundo wa kiolezo.Ikiwa muundo wa kiolezo ni changamani, muda wa kabla ya urekebishaji unaweza kuongezwa hadi dakika 5 - 10 ili kuboresha athari ya awali ya urekebishaji.
2) Halijoto ya annealing inahitaji kurekebishwa kulingana na thamani ya Tm ya primer, ambayo kwa ujumla imewekwa kuwa 3~5 ℃ chini kuliko thamani ya Tm ya primer;Kwa templates changamano, ni muhimu kurekebisha halijoto ya annealing na kupanua muda wa upanuzi ili kufikia amplification yenye ufanisi.
