Panya Genotyping Kit

Nambari ya Paka: HCR2021A

Bidhaa hii ni seti iliyoundwa kwa ajili ya utambuzi wa haraka wa aina za panya, ikijumuisha uchimbaji ghafi wa DNA na mfumo wa ukuzaji wa PCR.Bidhaa inaweza kutumika kwa ukuzaji wa PCR moja kwa moja kutoka kwa mkia wa panya, sikio, vidole vya miguu na tishu zingine baada ya kupasuka kwa Lysis Buffer na Proteinase k.Hakuna usagaji chakula mara moja, uchimbaji wa phenol-chloroform au utakaso wa safu, ambayo ni rahisi na kufupisha muda wa majaribio.Bidhaa hii inafaa kwa ukuzaji wa vipande lengwa hadi 2kb na miitikio ya PCR ya kuzidisha kwa hadi jozi 3 za vianzio.Mchanganyiko wa 2×Mouse Tissue Direct PCR una uhandisi wa DNA polymerase, Mg.²⁺, dNTP na mfumo ulioboreshwa wa bafa ili kutoa ufanisi wa juu wa ukuzaji na ustahimilivu wa vizuizi, ili athari za PCR ziweze kutekelezwa kwa kuongeza kiolezo na vianzio na kurejesha maji kwenye bidhaa hadi 1×.Bidhaa ya PCR iliyokuzwa kwa bidhaa hii ina msingi wa "A" maarufu mwishoni mwa 3′ na inaweza kutumika moja kwa moja kwa uundaji wa TA baada ya utakaso.

Vipengele

Masharti ya Uhifadhi

Bidhaa zinapaswa kuhifadhiwa kwa -25 ~ -15 ℃ kwa miaka 2.Baada ya kuyeyusha, Lysis Buffer inaweza kuhifadhiwa kwa 2~8℃ kwa matumizi mengi ya muda mfupi, na ichanganywe vizuri unapoitumia.

Maombi

Bidhaa hii inafaa kwa uchanganuzi wa mtoano wa panya, ugunduzi wa mabadiliko ya jeni, uchapaji jeni na kadhalika.

Vipengele

1.Uendeshaji rahisi: hakuna haja ya kuchimba DNA ya genomic;

2.Maombi pana: yanafaa kwa ajili ya kukuza moja kwa moja ya tishu mbalimbali za panya.

Maagizo

1.Kutolewa kwa DNA ya genomic

1) Maandalizi ya lysate

Lisate ya tishu hutayarishwa kulingana na idadi ya sampuli za panya zinazopaswa kusafishwa (lysate ya tishu inapaswa kutayarishwa kwenye tovuti kulingana na kipimo na kuchanganywa vizuri kwa matumizi), na idadi ya vitendanishi vinavyohitajika kwa sampuli moja ni kama ifuatavyo.

2) Maandalizi ya Sampuli na Lysis

Matumizi ya Tishu Yanayopendekezwa

Chukua kiasi kinachofaa cha sampuli za tishu za panya kwenye mirija safi ya centrifuge, ongeza 200μL ya lysate ya tishu safi kwenye kila bomba la centrifuge, vortex na tikisa, kisha uangulie kwa 55℃ kwa dakika 30, na kisha joto kwa 98℃ kwa dakika 3.

3) Centrifugation

Tikisa lysate vizuri na centrifuge saa 12,000 rpm kwa 5mins.Kidhibiti kikuu kinaweza kutumika kama kiolezo cha ukuzaji wa PCR.Iwapo kiolezo kinahitajika kwa ajili ya kuhifadhi, hamishia kifaa hicho cha juu hadi kwenye mirija tasa ya centrifuge na uhifadhi kwa -20℃ kwa wiki 2.

2.Ukuzaji wa PCR

Ondoa Mchanganyiko wa 2×Mouse Tissue Direct PCR kutoka -20℃ na uyayeyushe kwenye barafu, changanya kichwa chini na uandae mfumo wa majibu wa PCR kulingana na jedwali lifuatalo (fanya kazi kwenye barafu):

Kumbuka:

a) Kiasi kilichoongezwa haipaswi kuzidi 1/10 ya mfumo, na ikiwa ni nyingi sana, ukuzaji wa PCR unaweza kuzuiwa.

Masharti ya PCR Yanayopendekezwa

Kumbuka:

a) Halijoto ya kupenyeza: Kwa kurejelea thamani ya Tm ya kichungi, inashauriwa kuweka halijoto ya anneal kwa thamani ndogo ya Tm ya primer +3~5℃.

Matatizo na Masuluhisho ya Kawaida

1.Hakuna vipande vilivyolengwa

1) Bidhaa ya lysis nyingi.Chagua kiasi sahihi zaidi cha template, kwa kawaida si zaidi ya 1/10 ya mfumo;

2) Saizi kubwa sana ya sampuli.Punguza lysate mara 10 na kisha kukuza, au kupunguza ukubwa wa sampuli na upya upya;

3) Sampuli za tishu sio safi.Inashauriwa kutumia sampuli za tishu safi;

4) ubora duni wa primer.Tumia DNA ya jenomiki kwa ukuzaji ili kuthibitisha ubora wa kitangulizi na kuboresha muundo wa kiambishi.

2.Ukuzaji usio maalum

1) Halijoto ya kuchuja ni ya chini sana na nambari ya mzunguko ni ya juu sana.Kuongeza joto la annealing na kupunguza idadi ya mizunguko;

2) Mkazo wa kiolezo ni wa juu sana.Kupunguza kiasi cha template au kuondokana na template mara 10 baada ya amplification;

3) Ubora duni wa primer.Boresha muundo wa primer.

Vidokezo

1.Ili kuzuia uchafuzi kati ya sampuli, zana nyingi za sampuli zinapaswa kutayarishwa, na uso wa zana unaweza kusafishwa kwa 2% ya mmumunyo wa hipokloriti wa sodiamu au kisafishaji cha asidi nucleic baada ya kila sampuli ikiwa matumizi ya mara kwa mara yanahitajika.

2.Inashauriwa kutumia tishu safi za panya, na kiasi cha sampuli haipaswi kuwa kubwa sana ili kuepuka kuathiri matokeo ya amplification.

3.Lysis Buffer inapaswa kuepuka kuganda kwa mara kwa mara, na inaweza kuhifadhiwa kwa 2~8℃ kwa matumizi mengi ya muda mfupi.Ikiwa imehifadhiwa kwa joto la chini, mvua inaweza kutokea, na lazima ifutwa kabisa kabla ya matumizi.

4.Mchanganyiko wa PCR unapaswa kuepuka kuganda kwa mara kwa mara, na inaweza kuhifadhiwa kwa 4℃ kwa matumizi ya muda mfupi yanayorudiwa.

5.Bidhaa hii ni kwa ajili ya utafiti wa majaribio ya kisayansi pekee na haipaswi kutumiwa katika uchunguzi wa kimatibabu au matibabu.