Seti ya uchimbaji ya DNA/RNA ya Virusi
Seti hii inafaa kwa uchimbaji wa haraka wa DNA/RNA ya virusi vya usafi wa hali ya juu kutoka kwa sampuli kama vile swabs za nasopharyngeal, swabs za mazingira, supernatants za utamaduni wa seli, na supernatants ya homogenate ya tishu.Seti hii inategemea teknolojia ya utakaso wa membrane ya silika ambayo huondoa hitaji la kutumia vimumunyisho vya kikaboni vya phenoli/klorofomu au kunyesha kwa pombe kwa muda mrefu ili kutoa DNA/RNA ya virusi ya ubora wa juu.Asidi nyukilia zilizopatikana hazina uchafu na ziko tayari kutumika katika majaribio ya mkondo wa chini kama vile unukuzi wa kinyume, PCR, RT-PCR, PCR ya wakati halisi, mpangilio wa kizazi kijacho (NGS), na blot ya Kaskazini.
Masharti ya kuhifadhi
Hifadhi kwa 15 ~ 25 ℃, na usafirishe kwenye joto la kawaida
Vipengele
| Vipengele | 100RXNS |
| Bafa VL | 50 ml |
| Bafa RW | 120 ml |
| ddH2 O isiyo na RNase | 6 ml |
| Safu wima za RNA za FastPure | 100 |
| Mirija ya Kukusanya (2ml) | 100 |
| Mirija ya Mkusanyiko isiyo na RNase (1 .5ml) | 100 |
Bafa VL:Kutoa mazingira kwa ajili ya lysis na kisheria.
Bafa RW:Ondoa protini zilizobaki na uchafu mwingine.
ddH2O isiyo na RNase:Elute DNA/RNA kutoka kwa utando katika safu wima inayozunguka.
Safu wima za RNA za FastPure:Hasa adsorb DNA/RNA.
Mirija ya Mkusanyiko 2 ml:Kusanya kichujio.
Mirija ya Mkusanyiko isiyo na RNase 1.5 ml:Kusanya DNA/RNA.
Maombi
Vipu vya nasopharyngeal, swabs za mazingira, supernatants za utamaduni wa seli, na supernatants ya homogenate ya tishu.
Mater ya kujitayarishaials
Vidokezo vya bomba zisizo na RNase, mirija ya centrifuge isiyo na RNase isiyo na 1.5 ml, centrifuge, mchanganyiko wa vortex, na pipettes.
Mchakato wa Majaribio
Tekeleza hatua zote zifuatazo katika baraza la mawaziri la usalama wa viumbe.
1. Ongeza 200 μl ya sampuli kwenye bomba la centrifuge lisilo na RNase (tengeneza na PBS au 0.9% NaCl ikiwa sampuli haitoshi), ongeza 500 μl ya Buffer VL, changanya vizuri kwa kutapika kwa sekunde 15 - 30, na centrifuge. kwa muda mfupi kukusanya mchanganyiko chini ya bomba.
2. Weka Nguzo za FastPure za RNA kwenye Mirija ya Mkusanyiko 2 ml.Hamisha mchanganyiko kutoka Hatua ya 1 hadi Nguzo za FastPure RNA, centrifuge saa 12,000 rpm (13,400 × g) kwa dakika 1, na utupe filtrate.
3. Ongeza 600 μl ya Buffer RW kwenye Safu wima za FastPure RNA, centrifuge saa 12,000 rpm (13,400 × g) kwa sekunde 30, na utupe kichujio.
4. Rudia Hatua ya 3.
5. Weka safu tupu kwa 12,000 rpm (13,400 × g) kwa dakika 2.
6. Hamisha kwa uangalifu Safu wima za FastPure RNA hadi kwenye Mirija mipya ya Mkusanyiko isiyo na RNase yenye mililita 1.5 (zinazotolewa kwenye kifurushi), na uongeze 30 – 50 μl ya ddH2O isiyo na RNase hadi katikati ya utando bila kugusa safu.Ruhusu kusimama kwa joto la kawaida kwa dakika 1 na centrifuge saa 12,000 rpm (13,400 × g) kwa dakika 1.
7. Tupa Nguzo za FastPure RNA.DNA/RNA inaweza kutumika moja kwa moja kwa majaribio yanayofuata, au kuhifadhiwa kwa -30~ -15°C kwa muda mfupi au -85 ~-65°C kwa muda mrefu zaidi.
Vidokezo
Kwa matumizi ya utafiti tu.Haitumiwi katika taratibu za uchunguzi.
1. Sawazisha sampuli kwa joto la kawaida mapema.
2. Virusi vinaambukiza sana.Tafadhali hakikisha kuwa tahadhari zote za usalama zinachukuliwa kabla ya jaribio.
3. Epuka kugandisha mara kwa mara na kuyeyusha sampuli, kwa sababu hii inaweza kusababisha uharibifu au kupunguza mavuno ya DNA/RNA ya virusi iliyotolewa.
4. Vifaa vya kujitayarisha vinajumuisha vidokezo vya pipette isiyo na RNase, 1.5 ml zilizopo za centrifuge zisizo na RNase, centrifuge, mixer vortex, na pipettes.
5. Unapotumia kit, vaa koti la maabara, glavu za mpira zinazoweza kutumika, na barakoa inayoweza kutumika na utumie vifaa vya matumizi visivyo na RNase ili kupunguza hatari ya uchafuzi wa RNase.
6. Fanya hatua zote kwa joto la kawaida isipokuwa iwe maalum.
Utaratibu na Mtiririko wa Kazi
