Protini K NGS (poda)
Nambari ya paka: HC4507A
NGS Protease K ni serine protease iliyo na shughuli nyingi za kimeng'enya na umaalum mpana wa substrate. Kimeng'enya kwa upendeleo hutenganisha vifungo vya esta na vifungo vya peptidi karibu na C-terminal ya asidi ya amino haidrofobu, asidi ya amino iliyo na salfa na asidi ya amino yenye kunukia.Kwa hivyo, mara nyingi hutumiwa kuharibu protini kuwa peptidi fupi.NGS Protease K ni serine protease ya kawaida na Asp39-Yake69-Ser224triad ya kichocheo ambayo ni ya kipekee kwa serine proteases, na kituo cha kichocheo kimezungukwa na tow Ca.2+kuunganisha tovuti kwa ajili ya uimarishaji, kudumisha shughuli ya juu ya kimeng'enya chini ya anuwai ya hali.
Vipimo
| Mwonekano | Poda ya amofasi nyeupe hadi nyeupe, lyophilized |
| Shughuli mahususi | ≥40U/mg imara |
| DNase | Hakuna iliyotambuliwa |
| RNase | Hakuna iliyotambuliwa |
| Uzito wa viumbe | ≤50CFU/g imara |
| Mabaki ya asidi ya nyuklia | <5pg/mg imara |
Mali
| Chanzo | Albamu za Tritirachium |
| Nambari ya EC | 3.4.21.64(Recombinant kutoka kwa albamu ya Tritirachium) |
| Uzito wa Masi | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Pointi ya Isoelectric | 7.81 Mtini.1 |
| pH bora zaidi | 7.0-12.0 (Wote hufanya shughuli ya juu) Mchoro.2 |
| Joto bora zaidi | 65℃ Mtini.3 |
| Utulivu wa pH | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Mtini.4 |
| Utulivu wa joto | Chini ya 50℃ (pH 8.0, 30min) Mtini.5 |
| Utulivu wa uhifadhi | Imehifadhiwa kwa 25℃ kwa miezi 12 Mtini.6 |
| Vianzishaji | SDS, urea |
| Vizuizi | Diisopropyl fluorophosphate;benzylsulfonyl fluoride |
Masharti ya Uhifadhi
Hifadhi poda ya lyophilized kwa -25~-15 ℃ kwa muda mrefu mbali na mwanga;Baada ya kufutwa, weka kiasi kinachofaa kwa hifadhi ya muda mfupi kwa 2-8℃ mbali na mwanga au uhifadhi wa muda mrefu kwa -25~-15 ℃ mbali na mwanga.
Tahadhari
Vaa glavu za kujikinga na miwani unapotumia au kupima uzani, na uweke hewa ya kutosha baada ya kutumia.Bidhaa hii inaweza kusababisha athari ya mzio wa ngozi na kuwasha kwa macho.Ikivutwa, inaweza kusababisha mzio au dalili za pumu au dyspnea.Inaweza kusababisha kuwasha kwa kupumua.
Ufafanuzi wa kitengo
Kitengo kimoja cha NGS Protease K kinafafanuliwa kuwa kiasi cha kimeng'enya kinachohitajika ili hidrolisisi kasini kuwa 1 μmol L-tyrosine chini ya hali ya ubainishaji wa kawaida.
Maandalizi ya vitendanishi
| Kitendanishi | Mtengenezaji | Katalogi |
| Casein kiufundikutoka kwa maziwa ya bovin | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Asidi ya Trichloroacetic | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| Acetate ya sodiamu | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| Asidi ya asetiki | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| Kabonati ya sodiamu | Kemikali ya SinopharmReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-phenol | Sangon Biotech (Shanghai)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | Sigma | 93829 |
Wakala I:
Sehemu ndogo: 1% Casein kutoka kwa mmumunyo wa maziwa ya ng'ombe: kuyeyusha 1g ya kasini ya maziwa ya ng'ombe katika 50ml ya 0.1M myeyusho wa fosforasi ya sodiamu, pH 8.0, joto katika umwagaji wa maji ifikapo 65-70 °C kwa dakika 15, koroga na kuyeyusha, baridi kwa maji, ikirekebishwa. hidroksidi ya sodiamu hadi pH 8.0, na punguza hadi 100ml.
Reagent II:
Suluhisho la TCA: 0.1M trikloroasetiki asidi, 0.2M acetate ya sodiamu na 0.3M asidi asetiki (uzani wa 1.64g trikloroasetiki asidi + 1.64g ya acetate ya sodiamu + 1.724mL asidi asetiki mfululizo, ongeza 50mL maji yaliyochanganyikiwa, rekebisha na 4.HCl hadi 4 pH, rekebisha na dilu. 100 ml).
Kitendaji III:
0.4m suluhisho la sodiamu kabonati (uzani wa 4.24g ya kabonati ya sodiamu isiyo na maji na kuyeyushwa katika 100mL ya maji)
Wakala IV:
Reagent ya phenol ya Folin: punguza mara 5 na maji yaliyotengwa.
Wakala V:
Kiyeyushaji cha kimeng'enya: 0.1 M suluhisho la fosforasi ya sodiamu, pH 8.0.
Wakala VI:
Suluhisho la kawaida la L-tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine kufutwa na 0.2M HCl.
Utaratibu
1. Washa spectrophotometer ya UV-Vis na uchague kipimo cha photometric.
2. Weka urefu wa wimbi kama 660nm.
3. Washa umwagaji wa maji, weka joto hadi 37 ℃, hakikisha hali ya joto haijabadilika kwa dakika 3-5.
4. Preheat 0.5mL substrate katika tube 2mL centrifuge katika umwagaji wa maji 37℃ kwa 10mins.
5. Toa myeyusho wa kimeng'enya wa 0.5mL ndani ya bomba la centrifuge lililopashwa joto kwa dakika 10.Weka diluent ya kimeng'enya kama kikundi tupu.
6. Ongeza kitendanishi cha mililita 1.0 cha TCA mara tu baada ya majibu.Changanya vizuri na uanguke katika umwagaji wa maji kwa dakika 30.
7. Suluhisho la mmenyuko wa Centrifugate.
8. Ongeza vipengele vifuatavyo kwa utaratibu uliowekwa.
| Kitendanishi | Kiasi |
| Mkubwa | 0.5 ml |
| 0.4M Sodium carbonate | 2.5 ml |
| Reagent ya folin phenol | 0.5 ml |
9. Changanya vizuri kabla ya kualika kwenye umwagaji wa maji kwa 37℃ kwa dakika 30.
10. OD660iliamuliwa kama OD1;kikundi tupu cha udhibiti: Kiyeyushaji cha kimeng'enya kinatumika kuchukua nafasi ya suluhisho la kimeng'enya ili kubaini OD660kama OD2, ΔOD=OD1-OD2.
11. Mkunjo wa kiwango cha L-tyrosine: 0.5mL ukolezi tofauti wa myeyusho wa L-tyrosine, 2.5mL 0.4M kabonati ya sodiamu, 0.5mL kiyeyeshi cha Folin phenoli katika tube ya centrifuge ya 5mL, incubate katika 37℃ kwa dakika 30, tambua kwa OD660kwa mkusanyiko tofauti wa L-tyrosine, kisha kupata mkunjo wa kawaida Y=kX+b, ambapo Y ni mkusanyiko wa L-tyrosine, X ni OD600.
Hesabu
2: Jumla ya ujazo wa suluhisho la majibu (mL)
0.5: Kiasi cha myeyusho wa kimeng'enya (mL)
0.5: Kiasi cha majibu ya kioevu kinachotumika katika uamuzi wa kromojeni (mL)
10: Muda wa kujibu (dakika)
Df: Dilution nyingi
C: Mkusanyiko wa enzyme (mg/mL)
Takwimu
Mtini.1 mabaki ya DNA
| Sampuli | Ave C4 | Asidi ya Nucleic Ahueni(pg/mg) | Urejeshaji(%) | Jumla ya Nucleic Asidi ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-Free H2O | Haijabainishwa | - | - | - |
Mtini.2 Optimum pH
Mtini.3 Joto bora zaidi
Mtini.4 pH Utulivu
Mtini.5 Utulivu wa joto
Mtini.6 Uthabiti wa uhifadhi kwa 25℃
