Bst 2.0 DNA Polymerase (isiyo na Glycerol)
Bst DNA polymerase V2 inatokana na Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, ambayo ina 5′→3′ DNA polymerase shughuli na nguvu ya kubadilisha mnyororo shughuli, lakini hakuna 5′→3′ shughuli exonuclease.Bst DNA Polymerase V2 inafaa kabisa kwa uhamishaji wa kamba, TAA ya ukuzaji wa isothermal (Ukuzaji wa isothermal uliopatanishwa na Kitanzi) na mpangilio wa haraka.
Vipengele
| Sehemu | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(isiyo na glycerol) (8U/μL) | 0.2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1.5 ml | 2×1.5 mL | 3×10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1.5 ml | 2×1.5 mL | 2×10 ml |
Maombi
1.Ukuzaji wa isothermal ya LAMP
2. DNA strand moja kuhama mmenyuko
3.Mfuatano wa jeni wa juu wa GC
4.Mpangilio wa DNA wa kiwango cha nanogram.
Hali ya Uhifadhi
Usafiri wa chini ya 0°C na kuhifadhiwa kwa -25°C~-15°C.
Ufafanuzi wa Kitengo
Kitengo kimoja kinafafanuliwa kuwa kiasi cha kimeng'enya kinachojumuisha 25 nmol ya dNTP kwenye nyenzo isiyoyeyuka ya asidi katika dakika 30 kwa 65°C.
Udhibiti wa Ubora
1.Uchunguzi wa Usafi wa Protini (SDS-PAGE):Usafi wa Bst DNA polymerase V2 umebainishwa ≥99% na uchanganuzi wa SDS-PAGE kwa kutumia ugunduzi wa Coomassie Blue.
2.Shughuli ya Exonuclease:Uamilisho wa mmenyuko wa 50 μL ulio na kiwango cha chini cha 8 U ya Bst DNA polimasi V2 na 1 μg λ -Hind Ⅲ digest DNA kwa saa 16 saa 37 ℃ husababisha hakuna uharibifu unaotambulika kama ilivyobainishwa.
3.Shughuli ya Nickase:Uamilisho wa mmenyuko wa 50 μL ulio na kiwango cha chini cha 8 U ya Bst DNA polimasi V2 na 1 μg pBR322 DNA kwa saa 16 katika 37°C husababisha uharibifu usioweza kutambulika kama ilivyobainishwa.
4.Shughuli ya RNase:Uamilisho wa mmenyuko wa 50 μL ulio na kiwango cha chini cha 8 U ya Bst DNA polimasi V2 na 1.6 μg MS2 RNA kwa saa 16 katika 37°C husababisha uharibifu usioweza kutambulika kama ilivyobainishwa.
5.E. coli DNA:120 U of Bst DNA polymerase V2 inakaguliwa kwa uwepo wa E. coli genomic DNA kwa kutumia TaqMan qPCR yenye vianzio maalum kwa E. coli 16S rRNA locus.Uchafuzi wa DNA ya E. koli ni ≤1 Nakala.
Mwitikio wa LAMP
| Vipengele | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTP (10mM kila moja) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Kijani (25×)a | 1.0 μL |
| Mchanganyiko wa primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (isiyo na glycerol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Kiolezo | × μL |
| ddH₂O | Hadi 25 μL |
Vidokezo:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Kulingana na mahitaji ya majaribio, rangi nyingine zinaweza kutumika kama mbadala;
2) b.Mchanganyiko wa kwanza: hupatikana kwa kuchanganya 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB na juzuu zingine.
Mwitikio na Hali
1 × HC Bst V2 Buffer, halijoto ya incubation ni kati ya 60°C na 65°C.
Kuzima joto
80 °C, dakika 20
