Nuclease ya Juu
UltraNuclease ni uhandisi wa kijenetiki unaotokana na Serratia marcescens, ambao unaweza kuharibu DNA au RNA, iwe mara mbili au moja iliyokwama, ya mstari au ya mviringo chini ya hali mbalimbali, huharibu kabisa asidi ya nucleic kuwa oligonucleotides ya 5'-monofosfati na urefu wa 3-5. .Baada ya urekebishaji wa uhandisi wa kijeni, bidhaa hiyo ilichachushwa, ikaonyeshwa, na kusafishwa katika Escherichia coli (E. koli), ambayo inapunguza mnato wa utafiti wa kisayansi wa nguvu ya juu zaidi na seli, lakini pia kuboresha ufanisi wa utakaso na utafiti wa utendaji kazi wa protini.Inaweza pia kutumika katika matibabu ya jeni, utakaso wa virusi, utengenezaji wa chanjo, tasnia ya dawa ya protini na polysaccharide kama kitendanishi cha kuondoa mabaki ya asidi ya nukleiki.
Vipengele vya bidhaa
| Nambari ya CAS. | 9025-65-4 |
| Nambari ya EC. | |
| Uzito wa Masi | 30 kDa |
| Pointi ya Isoelectric | 6.85 |
| Usafi wa Protini | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Shughuli Maalum | ≥1.1×106U/mg |
| OptimumJoto | 37°C |
| pH bora zaidi | 8.0 |
| Shughuli ya Protease | hasi |
| Uzito wa viumbe | ＜10CFU/100,000U |
| Protini ya Seli-Hosti iliyobaki | ≤10ppm |
| Metali Nzito | ≤10ppm |
| Endotoxin ya bakteria | ＜0.25EU/1000U |
| Bafa ya Hifadhi | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2 , 20mM NaCl, 50% Glycerol |
Masharti ya kuhifadhi
≤0°C usafiri;-25~-15°C Hifadhi, uhalali wa miaka 2 (epuka kugandisha-yeyusha).
Ufafanuzi wa Kitengo
Kiasi cha kimeng'enya kilichotumiwa kubadilisha thamani ya ufyonzwaji wa △A260 kwa 1.0 ndani ya dakika 30 ifikapo 37 °C, pH 8.0, sawa na DNA ya salmoni ya 37μg iliyoyeyushwa kwa kukatwa katika oligonucleotidi, ilifafanuliwa kuwa kitengo amilifu(U).
Udhibiti wa ubora
Protini ya Seli-Hosti iliyobaki: ELISA kit
•Protease Mabaki: 250KU/mL UltraNuclease iliguswa na mkatetaka kwa dakika 60, hakuna shughuli iliyogunduliwa.
•Endotoxin ya bakteria: Jaribio la LAL, Pharmacopoeia ya Jamhuri ya Watu wa China Juzuu ya 4 (Toleo la 2020) mbinu ya kupima kikomo cha jeli.Kanuni za Jumla (1143).
•Uzito wa Kibiolojia: Pharmacopoeia ya Jamhuri ya Watu wa Uchina Juzuu ya 4 (Toleo la 2020)— Jumla
Sheria za Mtihani wa Kuzaa (1101), Kiwango cha Kitaifa cha PRC, GB 4789.2-2016.
•Metali Nzito:ICP-AES, HJ776-2015.
Operesheni
Shughuli ya UltraNuclease ilizuiwa kwa kiasi kikubwa wakati mkusanyiko wa SDS ulikuwa zaidi ya 0.1% au EDTA
mkusanyiko ulikuwa zaidi ya 1mM. Surfactant Triton X- 100, Kati ya 20 na Tween 80 haikuwa na athari kwenye nuclease.
mali wakati mkusanyiko ulikuwa chini ya 1.5%.
| Operesheni | Operesheni Bora | Operesheni Halali |
| Halijoto | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mm | 1-15 mm |
| DTT | 0- 100mM | >100mM |
| 2-Mercaptoethanol | 0- 100mM | >100mM |
| Monovalent chuma ion (Na+, K+ n.k.) | 0-20mm | 0-200mM |
| PO43- | 0-10 mm | 0- 100mM |
Matumizi na Kipimo
• Ondoa asidi ya nyuklia ya kigeni kutoka kwa bidhaa za chanjo, punguza hatari ya mabaki ya sumu ya asidi ya nukleiki na uboresha usalama wa bidhaa.
• Punguza mnato wa kioevu cha malisho kinachosababishwa na asidi ya nukleiki, fupisha muda wa usindikaji na kuongeza mavuno ya protini.
• Ondoa asidi ya nukleiki iliyofunika chembe (virusi, mwili wa kujumuisha, n.k.), ambayo inafaa.
kwa kutolewa na utakaso wa chembe.
| Aina ya Majaribio | Uzalishaji wa Protini | Virusi, Chanjo | Dawa za Kiini |
| Nambari ya seli | 1 g uzito wa seli mvua (imesimamishwa tena na bafa ya 10ml) | 1L chachu kioevu supernatant | 1L utamaduni |
| Kiwango cha chini cha Kipimo | 250U | 100U | 100U |
| Kipimo kilichopendekezwa | 2500U | 25000U | 5000U |
• Matibabu ya nyuklia yanaweza kuboresha utatuzi na urejeshaji wa sampuli kwa kromatografia ya safu, electrophoresis na uchanganuzi wa blotting.
• Katika tiba ya jeni, asidi ya nucleic huondolewa ili kupata virusi vinavyohusiana na adeno iliyosafishwa.
