Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase ni DNA polymerase ya mwanzo moto.Bidhaa hii haiwezi tu kuzuia kwa njia bora zaidi mwitikio usio mahususi unaosababishwa na upachikaji usio maalum wa vianzio au mkusanyiko wa vitangulizi katika mchakato wa utayarishaji na ukuzaji wa mfumo wa PCR.Kwa hivyo, ina umaalum bora na inafaa zaidi kwa ukuzaji wa violezo vya mkusanyiko wa chini, na inafaa kwa athari ya ukuzaji wa PCR iliyozidishwa.Zaidi ya hayo, bidhaa hii ina utumiaji mzuri sana, na matokeo thabiti ya ukuzaji yanaweza kupatikana katika aina tofauti za athari za PCR.
Vipengele
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimasi
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ bila malipo) (si lazima)
3.25 mm MgCl2(si lazima)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ bila malipo) haina dNTP na Mg²+, tafadhali ongeza dNTPs na MgCl2wakati wa kuandaa mfumo wa mmenyuko.
Programu Zinazopendekezwa
1.Ukuzaji wa haraka.
2.Ukuzaji mwingi.
3.Ukuzaji wa moja kwa moja wa damu, swabs, na sampuli zingine.
4.Utambuzi wa magonjwa ya mfumo wa kupumua.
Hali ya Uhifadhi
-20°C kwa uhifadhi wa muda mrefu, inapaswa kuchanganywa vizuri kabla ya matumizi, epuka kufungia mara kwa mara.
*Iwapo mvua itanyesha baada ya friji, ni kawaida;inashauriwa kusawazisha joto la kawaida kabla ya kuchanganya na kutumia.
Ufafanuzi wa Kitengo
Kitengo kimoja amilifu (U) kinafafanuliwa kuwa kiasi cha kimeng'enya ambacho hujumuisha nmol 10 ya deoxyribonucleotide kwenye nyenzo isiyoyeyuka asidi ifikapo 74°C kwa dakika 30 kwa kutumia DNA ya manii ya lax iliyoamilishwa kama kiolezo/kitangulizi.
Udhibiti wa Ubora
1.Usafi wa kielektroniki wa SDS-PAGE zaidi ya 98%.
2.Usikivu wa kukuza, udhibiti wa kundi-kwa-batch, utulivu.
3.Hakuna shughuli ya viini vya nje, hakuna endonuclease ya nje au uchafuzi wa exonuclease
Maagizo
Usanidi wa Majibu
| Vipengele | Kiasi (μL) | Umakini wa Mwisho |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ bila malipo)a | 5 | 1× |
| dNTP (10mM kila dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mm MgCl2 | 2-8 | 1-4 mm |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × Mchanganyiko wa Primerb | 2 | 1× |
| Kiolezo | - | ＜ 1 μg/majibu |
| ddH2O | Hadi 50 | - |
Vidokezo:
1) a.Bafa haina dNTP na Mg²+, tafadhali ongeza dNTPs na MgCl2wakati wa kuandaa mfumo wa mmenyuko.
2) b.Ikitumika kwa qPCR/qRT-PCR, vichunguzi vya umeme vinapaswa kuongezwa kwenye mfumo wa majibu.Kawaida, mkusanyiko wa mwisho wa primer wa 0.2 μM utatoa matokeo mazuri;ikiwa utendaji wa mmenyuko ni duni, mkusanyiko wa primer unaweza kubadilishwa katika anuwai ya 0.2-1 μM.Mkusanyiko wa probe kawaida huboreshwa katika anuwai ya 0.1-0.3 μM.Majaribio ya gradient ya ukolezi yanaweza kufanywa ili kupata mchanganyiko bora wa primer na probe.
Itifaki ya baiskeli ya joto
| PCR ya kawaidamchakato | |||
| Hatua | Halijoto | Wakati | Mizunguko |
| Pre-denaturation | 95℃ | Dakika 1-5 | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Annealing / Upanuzi | 56-64 ℃ | 20-60 sek | |
| PCR harakamchakato | |||
| Hatua | Halijoto | Wakati | Mizunguko |
| Pre-denaturation | 95℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Annealing / Upanuzi | 56-64 ℃ | 5-20 sek | |
Vidokezo
1.Kiwango cha ukuzaji cha polimasi ya haraka ya DNA haipaswi kuwa chini ya 1 kb/10 s.Kiwango cha kupanda na kushuka kwa halijoto, hali ya udhibiti wa halijoto na ufanisi wa upitishaji joto wa ala tofauti za PCR hutofautiana sana, kwa hivyo inashauriwa kuboresha hali bora za majibu kwa kifaa mahususi cha haraka cha PCR.
2.Mfumo huo unaweza kubadilika sana, na umaalumu wa hali ya juu na usikivu.
3.Inafaa kwa matumizi kama vitendanishi vya utambuzi wa hali ya juu vya PCR, na inaweza kutumika katika miitikio ya ukuzaji ya PCR nyingi.
4.5′→3′ shughuli ya polima, 5′→3′ shughuli ya exonuclease;hakuna 3′→5′ shughuli exonuclease;hakuna kazi ya kusahihisha.
5.Inafaa kwa upimaji wa ubora na kiasi wa PCR na RT-PCR.
6.Mwisho wa 3′ wa bidhaa ya PCR ni A, ambayo inaweza kuunganishwa moja kwa moja kwenye vekta ya T.
7.Njia ya hatua tatu inapendekezwa kwa primers na joto la chini la annealing au kwa upanuzi wa vipande vya muda mrefu zaidi ya 200 bp.
