DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) ni endodeoxyribonuclease ambayo inaweza kusaga DNA yenye nyuzi moja au mbili.Inatambua na kupasua vifungo vya phosphodiester ili kuzalisha monodeoxynucleotides au oligodeoxynucleotides iliyounganishwa moja au mbili na vikundi vya phosphate kwenye 5′-terminal na hidroksili kwenye 3′-terminal.Shughuli ya DNase I inategemea Ca2+ na inaweza kuamilishwa na ayoni za metali tofauti kama vile Mn2+ na Zn2+.5mM Ca2+ hulinda kimeng'enya dhidi ya hidrolisisi.Mbele ya Mg2+, kimeng'enya kingeweza kutambua na kugawanya tovuti yoyote kwenye uzi wowote wa DNA.Katika uwepo wa Mn2+, nyuzi mbili za DNA zinaweza kutambuliwa kwa wakati mmoja na kushikana karibu eneo lile lile ili kuunda vipande vya mwisho bapa vya DNA au vipande vya DNA vinavyonata vyenye nyukleotidi 1-2 zinazochomoza.
Mali ya Bidhaa
Bovine Pancreas DNase I ilionyeshwa katika mfumo wa kujieleza chachu na kutakaswa.
Cwapinzani
| Sehemu | Kiasi | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, bila RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5×1mL | 5 × 10mL |
Usafiri na Uhifadhi
1. Uthabiti wa Hifadhi: – 15℃~-25℃ kwa kuhifadhi;
2.Utulivu wa Usafiri: Usafiri chini ya pakiti za barafu;
3. Imetolewa kwa: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% GLYCEROL, pH 7.6 kwa 25℃.
Ufafanuzi wa Kitengo
Sehemu moja inafafanuliwa kama kiasi cha kimeng'enya ambacho kitaharibu kabisa 1 µg ya pBR322 DNA katika dakika 10 katika 37°C.
Udhibiti wa Ubora
RNase:5U ya DNase I yenye 1.6 μg MS2 RNA kwa saa 4 saa 37 ℃ haitoi uharibifu kama inavyobainishwa na electrophoresis ya jeli ya agarose.
Bakteria Endotoxin:Jaribio la LAL, kulingana na toleo la Kichina la Pharmacopoeia IV 2020, njia ya mtihani wa kikomo cha gel, kanuni ya jumla (1143).Maudhui ya endotoxin ya bakteria yanapaswa kuwa ≤10 EU/mg.
Maagizo ya Matumizi
1. Tayarisha suluhisho la majibu katika bomba lisilo na RNase kulingana na idadi iliyoorodheshwa hapa chini:
| Sehemu | Kiasi |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, bila RNase (5U/μL) | 1 U kwa μg RNA |
| ddH2O | Hadi 10 μL |
2.37 ℃ kwa dakika 15;
3.Ongeza bafa ya kuzima ili kusimamisha majibu, na joto saa 65℃ kwa dakika 10 ili kuzima DNase I. Sampuli inaweza kutumika moja kwa moja kwa jaribio linalofuata la unukuu.
Vidokezo
1.Tumia 1U DNase I kwa μg ya RNA, au 1U DNase I kwa chini ya 1μg ya RNA.
2.EDTA inapaswa kuongezwa kwa mkusanyiko wa mwisho wa 5 mm ili kulinda RNA dhidi ya kuharibika wakati wa kuzima kimeng'enya.
