CHO HCP ELISA Kit
Njia ya ELISA ya immunosorbent ya hatua moja hutumiwa katika jaribio hili.Sampuli zilizo na CHOK1 HCP huguswa kwa wakati mmoja na kingamwili ya mbuzi yenye lebo ya HRP na kingamwili ya anti-CHOK1 iliyopakwa kwenye bamba la ELISA, hatimaye kuunda sandwich changamano ya kingamwili-awamu dhabiti- yenye lebo ya HCP.Antijeni-antibody isiyofungwa inaweza kuondolewa kwa kuosha sahani ya ELISA.Sehemu ndogo ya TMB huongezwa kwenye kisima kwa majibu ya kutosha.Uendelezaji wa rangi umesimamishwa baada ya kuongeza ufumbuzi wa kuacha, na OD au thamani ya kunyonya ya ufumbuzi wa majibu katika 450/650nm inasomwa na msomaji wa microplate.Thamani ya OD au thamani ya kunyonya inawiana na maudhui ya HCP kwenye suluhu.Kutokana na hili, mkusanyiko wa HCP katika suluhisho unaweza kuhesabiwa kulingana na curve ya kawaida.
Maombi
Seti hii hutumika kutambua kwa wingi maudhui ya masalia ya protini ya seli jeshi CHOK1 katika sampuli.
Cwapinzani
| S/N | Sehemu | Kuzingatia | Masharti ya Uhifadhi |
| 1 | Kiwango cha CHOK1 HCP | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃, linda dhidi ya mwanga |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, linda kutokana na mwanga |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Acha suluhisho | NA | RT |
| 6 | Vifungaji vya Microplate | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | High adsorption kabla ya mipako Sahani | NA | 2-8℃ |
Kifaa Kinahitajika
| Vifaa vya matumizi / Vifaa | Utengenezaji | Katalogi |
| Msomaji wa Microplate | Vifaa vya Masi | Spectra Max M5, M5e, au sawa |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, au sawa |
| Mchanganyiko wa Vortex | IKA | MS3 Digital, au sawa |
Uhifadhi na utulivu
1.Usafiri kwa -25~-15°C.
2.Masharti ya uhifadhi ni kama inavyoonyeshwa kwenye Jedwali 1;vipengele 1-2 huhifadhiwa ≤–20°C,5-6 huhifadhiwa RT,3,4, 7,8 zimehifadhiwa kwa 2-8℃;muda wa uhalali ni miezi 12.
Vigezo vya bidhaa
1.Unyeti: 1ng/mL
2.Aina ya utambuzi: 3- 100ng/mL
3.Usahihi: CV ya majaribio ya ndani≤ 10%, CV ya majaribio ≤ 15%
4.Chanjo ya HCP:>80%
5.Umaalumu: Seti hii ni ya ulimwengu wote kwa kuwa inaathiriwa haswa na CHOK1 HCP bila mchakato wa utakaso.
Maandalizi ya reagent
1.PBST 0.05%
Chukua 15 ml ya 20×PBST 0.05%, diluted katika ddH2O, na imeundwa hadi 300 ml.
2.1.0% BSA
Chukua 1g ya BSA kutoka kwenye chupa na uimimishe katika 100 ml ya PBST 0.05%, changanya vizuri hadi itayeyuke kabisa, na uhifadhi kwa 2-8°C.Bafa ya dilution iliyoandaliwa ni halali kwa siku 7.Inashauriwa kuandaa kama inahitajika.
3.Suluhisho la kugundua 2μg/mL
Chukua 48μL ya 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP na upunguze katika 11,952μL ya 1% BSA ili kupata mkusanyiko wa mwisho wa 2μg/mL ufumbuzi wa utambuzi.
4.QC na Maandalizi ya Viwango vya CHOK1 HCP
| Mrija Hapana. | Asili | Kuzingatia | Kiasi | 1%BSA | Jumla ya Kiasi | Mwisho |
| A | Kawaida | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1,000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Jedwali: Maandalizi ya QC na Viwango
Utaratibu wa Uchambuzi
1.Tayarisha vitendanishi kama ilivyoonyeshwa katika "Maandalizi ya Kitendanishi" hapo juu.
2.Chukua 50μL ya viwango, sampuli na QCs (rejea Jedwali 3) kwenye kila kisima, kisha ongeza 100μL ya suluhisho la Kugundua (2μg/mL);Funika sahani na sealer, na uweke sahani ya ELISA kwenye thermomixer.Ingiza kwa 500rpm, 25±3℃ kwa masaa 2.
3.Geuza microplate kwenye kuzama na utupe suluhisho la mipako.Pipette 300μL ya PBST 0.05% ndani ya kila kisima ili kuosha sahani ya ELISA na kutupa suluhisho, na kurudia kuosha mara 3.Geuza sahani kwenye kitambaa safi cha karatasi na kavu.
4.Ongeza 100μL ya substrate ya TMB (ona Jedwali 1) kwa kila kisima, funga sahani ya ELISA, na uangulie gizani kwa 25±3℃ kwa dakika 15.
5.Pipette 100μL ya suluhisho la kuacha kwenye kila kisima.
6.Pima ufyonzaji kwa urefu wa mawimbi wa 450/650nm ukitumia kisomaji cha mabamba madogo.
7.Changanua data na SoftMax au programu sawa.Panga mkunjo wa kawaida kwa kutumia modeli ya urejeleaji wa vifaa vya vigezo vinne.
Mfano wa Mviringo wa Kawaida
KUMBUKA: Ikiwa mkusanyiko wa HCP katika sampuli unazidi kikomo cha juu cha mkunjo wa kawaida, inahitaji kuongezwa vizuri kwa bafa ya dilution kabla ya kufanyiwa majaribio.
MAELEZO
Suluhisho la kusimamisha ni 2M asidi ya sulfuriki, tafadhali shughulikia kwa uangalifu ili kuepuka kumwagika!
