BspQI
BspQI inaweza kuonyeshwa tena katika E. koli ambayo inaweza kutambua tovuti maalum na zinazozalishwa chini yake
BspQI, kizuizi cha II cha kizuizi cha endonuclease endonuclease, imechukuliwa kutoka kwa aina ya E. koli inayojumuisha tena ambayo hubeba aina ya BspQI iliyobuniwa na kurekebishwa kutoka kwa Bacillus sphaericus.Inaweza kutambua tovuti maalum, na mlolongo wa utambuzi na tovuti za upasuaji ni kama ifuatavyo:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Vipengele vya Bidhaa
1. Shughuli ya juu, Usagaji chakula haraka;
2. Shughuli ya nyota ya chini, kuhakikisha kukata sahihi kama "scalpel";
3. Bila BSA na wanyama-asili bure;
Unyeti wa Methylation
Dni methylation:Sio Nyeti;
Dcm methylation:Sio Nyeti;
CpG Methylation:Sio Nyeti;
Masharti ya kuhifadhi
Bidhaa inapaswa kusafirishwa ≤ 0℃;Hifadhi katika hali ya -25~-15℃.
Bafa ya hifadhi
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X- 100 na 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C).
Ufafanuzi wa Kitengo
Kitengo kimoja kinafafanuliwa kuwa kiasi cha kimeng'enya kinachohitajika kusaga 1µg ya DNA ya Udhibiti wa Ndani katika saa 1 katika 50°C katika ujazo wa jumla wa mmenyuko wa 50 µL.
Udhibiti wa Ubora
Uchunguzi wa Usafi wa Protini (SDS-PAGE):Usafi wa BspQI ulibainishwa ≥95% na uchanganuzi wa SDS-PAGE.
RNase:10U ya BspQI yenye 1.6μg MS2 RNA kwa saa 4 kwa 50℃ haitoi uharibifu kama inavyobainishwa na electrophoresis ya jeli ya agarose.
Shughuli Isiyo Maalum ya DNase:10U ya BspQI yenye 1μg λ DNA kwa 50℃ kwa saa 16, ikilinganishwa na 50℃ kwa saa 1, haitoi DNA ya ziada kama inavyobainishwa na electrophoresis ya gel ya agarose.
Kuunganisha na kukata tena:Baada ya usagaji wa 1 μg λDNA na 10U BspQI, vipande vya DNA vinaweza kuunganishwa na ligase ya DNA ya T4 ifikapo 16ºC.Na vipande hivi vilivyounganishwa vinaweza kukatwa tena kwa BspQI.
E. koli DNA: Ugunduzi wa E. coli 16s rDNA mahususi wa TaqMan qPCR ulionyesha kuwa mabaki ya jenomu ya E.coli ≤ 0.1pg/ul.
Mabaki ya protini ya jeshi:≤ 50 ppm
Bakteria Endotoxin: Jaribio la LAL, kulingana na toleo la Kichina la Pharmacopoeia IV 2020, njia ya mtihani wa kikomo cha gel, kanuni ya jumla (1143).Maudhui ya endotoxin ya bakteria yanapaswa kuwa ≤10 EU/mg.
Mfumo wa majibu na masharti
| Sehemu | Kiasi |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 mg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | Hadi 50 μL |
Masharti ya mmenyuko: 50 ℃, Saa 1 ~ 16.
Kuzima joto: 80 ° C kwa dakika 20.
Mfumo wa mmenyuko unaopendekezwa na masharti yanaweza kutoa athari nzuri ya usagaji wa kimeng'enya, ambayo ni ya marejeleo pekee, tafadhali rejelea matokeo ya majaribio kwa maelezo zaidi.
Maombi ya bidhaa
Kizuizi cha usagaji wa endonuclease, Uunganishaji wa haraka.
Vidokezo
1. Kiasi cha kimeng'enya ≤ 1/10 ya kiasi cha majibu.
2. Shughuli ya nyota inaweza kutokea wakati mkusanyiko wa glycerol ni zaidi ya 5%.
3. Shughuli ya uondoaji inaweza kutokea wakati Substrate iko chini ya uwiano uliopendekezwa.
