2×PCR Super Mix (pamoja na Rangi)
2× PCR Master Mix ina Taq DNA Polymerase, dNTPs, na vijenzi vingine vinavyohitajika kwa PCR.Master Mix ni thabiti kwa miezi 3 kwa 4℃ na vidhibiti vyetu vilivyoboreshwa.Suluhisho la mchanganyiko wa awali limeboreshwa kwa PCR ya kawaida na iko tayari kutumika kwa kuongeza kiolezo cha DNA na vianzio.Bidhaa za PCR zinaweza kupakiwa moja kwa moja kwa electrophoresis na rangi ya bluu ya bromophenol iliyopakiwa awali.Bidhaa zilizoimarishwa zina mbenuko 3 '-dA na zinaweza kutengenezwa kwa urahisi kuwa T vekta.2×PCR Master Mix hurahisisha utaratibu wa PCR na kupunguza uchafuzi.
Masharti ya Uhifadhi
Bidhaa zinapaswa kuhifadhiwa kwa -25 ℃~-15 ℃ kwa miaka 2.
Vipimo
| Uaminifu (dhidi ya Taq) | 1× |
| Moto Anza | No |
| Overhang | 3'-A |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Umbizo la Mwitikio | SuperMix au Master Mix |
| Kasi ya Mwitikio | Kawaida |
| Aina ya Bidhaa | Mchanganyiko Mkuu wa PCR (2x) |
Maagizo
1.Mfumo wa Majibu
| Vipengele | Kiasi(μL) |
| DNA ya Kiolezo | Inafaa |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| 2× PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | hadi 50 |
2.Itifaki ya Ukuzaji
| Hatua za mzunguko | Halijoto (°C) | Wakati | Mizunguko |
| Denaturation ya awali | 94 | 5 dakika | 1 |
| Denaturation | 94 | 30 sek | 35 |
| Annealing | 50-60 | 30 sek | |
| Ugani | 72 | 30-60 sek/kb | |
| Ugani wa mwisho | 72 | Dakika 10 | 1 |
Kumbuka:
1) Matumizi ya kiolezo: 50-200ng genomic DNA;0.1-10ng DNA ya plasmid.
2) Mg2+ukolezi: Bidhaa hii ina 3mM ya MgCl2, inayofaa kwa athari nyingi za PCR.
3) Halijoto ya kuchuja: Tafadhali rejelea thamani ya kinadharia ya Tm ya vianzio.Halijoto ya annealing inaweza kuwekwa kuwa 2-5℃ chini kuliko thamani ya kinadharia ya primer.
4) Muda wa kuongeza: Kwa kitambulisho cha molekuli, 30 sec/kb inapendekezwa.Kwa uundaji wa jeni, 60 sec/kb inapendekezwa.
Vidokezo
1.Bidhaa za PCR zilizo na 2× PCR Master Mix hazifai kwa electrophoresis ya gel ya Polyacrylamide.
2.Kwa usalama na afya yako, tafadhali vaa makoti ya maabara na glavu zinazoweza kutumika kwa uendeshaji.
3.Inatumika kwa matumizi ya utafiti PEKEE!
